AAV实验中常用的对照病毒(Control AAV)主要用于验证实验系统是否正常、评估载体转导效率、排除背景信号等。
一、阴性对照(Negative Controls)
1. 空载体 AAV(AAV-Empty / AAV-Null)
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仅包含 ITR,不含任何表达盒
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用于区分病毒本身 vs. 目的基因带来的效应
2. 无功能报告基因的 AAV(如 AAV-ΔGFP)
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删除关键序列,使其无法表达
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适用于背景荧光或非特异信号判断
二、阳性对照(Positive Controls)
1. 表达荧光蛋白的AAV(AAV-GFP、AAV-mCherry、AAV-tdTomato)
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最常见的阳性对照
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快速验证包装成功、滴度有效、感染效率正常
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适用于体外与体内实验
2. AAV-Luc(萤火虫荧光素酶 / NanoLuc)
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适合定量检测
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可用于活体成像(BLI)、滴度功能对照
三、组织特异性验证对照
如果实验使用组织特异启动子,常选用对应的报告基因作为对照:
1. AAV-CaMKIIa-GFP / AAV-hSyn-GFP(神经元特异)
用于验证启动子在神经组织中的表达是否正确。
2. AAV-GFAP-GFP(星形胶质细胞特异)
3. AAV-MCK-GFP(肌肉特异)
这些对照病毒用于确认“组织特异启动子”是否按期望表达。
四、血清型对照(Serotype Controls)
当比较感染性或筛选最佳血清型时,会将相同的GFP表达框装入不同血清型中:
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AAV2-GFP
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AAV8-GFP
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AAV9-GFP
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AAV-PHP.eB-GFP
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AAV-DJ-GFP 等
常用于滴度比较、组织倾向性筛选。
五、CRISPR 实验中的对照 AAV
1. AAV-Cas9 only(无gRNA)
排除 Cas9 表达带来的背景效应。
2. AAV-gRNA scramble(乱序 gRNA)
用于基因敲除实验的阴性对照。
3. AAV-gRNA targeting-known gene(阳性对照)
用已知可敲除的基因作为功能验证。
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