慢病毒包装过程中易发生什么污染

在慢病毒（Lentivirus）包装与生产的过程中，最常见的风险之一就是污染，既可来自生物学来源，也可能是实验环境或操作不当导致。以下为常见污染类型与重点预防要点，便于规避实验失败和安全风险：

🔬 微生物污染（Bacterial/Fungal contamination）

🔸 原因：培养基、血清、移液枪头污染；细胞状态差；无菌操作不规范。
🔸 表现：培养液浑浊、pH迅速变化、细胞大量死亡，病毒滴度显著下降。
🔸 预防：

• 严格无菌操作、定期酒精及紫外消毒

• 使用一次性耗材，培养基过滤

• 细胞状态不佳时不要进行包装

🦠 支原体污染（Mycoplasma contamination）

🔸 高频隐性污染，最被忽视但影响最大
🔸 影响：降低细胞转染效率、病毒产量不稳定、实验数据失真
🔸 预防与检测：

• 定期支原体PCR/荧光染色/试纸检测

• 污染时立即丢弃或用特定试剂处理但不推荐继续用于病毒生产

🧬 质粒交叉污染（Plasmid mix-up）

🔸 在三/四质粒体系中，错误拼接或浓度比例不正确会显著影响滴度
🔸 原因：质粒样品混淆、标记不清、转染体系配比错误
🔸 预防：

• 质粒保存与使用前明确标识

• 电泳验证及测浓度

• 转染体系严格按要求比例配置

🧪 交叉病毒污染（Cross-virus contamination）

🔸 尤其在具有慢病毒、腺病毒/AAV共同使用实验室常见
🔸 可能导致实验动物感染或数据不可解释
🔸 预防：

• 病毒实验分区操作，不交叉使用移液器

• 同一天避免处理不同病毒体系

🧯 溢液/废液处理不当污染环境

• 废液须含10%漂白或高效消毒剂处理 ≥30min

• 固废高压灭菌后按感染性废物处置

总结