AAV 和慢病毒在细胞产毒(生产病毒颗粒)时最大的区别,主要集中在 生产体系、细胞状态、产量特点和安全性 上。
AAV和慢病毒:产毒时最大的区别
1. 生产细胞状态:贴壁 vs 悬浮能力不同(最关键差异之一)
| 病毒 | 常用生产细胞 | 细胞状态特点 |
| AAV | HEK293 / HEK293T | 传统为 贴壁 生产,也可适配到悬浮系统;对细胞生长状态要求高 |
| 慢病毒 | HEK293T | 多采用 贴壁 生产;悬浮系统也能做但门槛更高 |
2. 产毒体系(质粒数不同,是实际操作上最大的区别)
| 病毒 | 标准包装体系 |
| AAV | 三质粒体系: |
| ① AAV 载体 plasmid | |
| ② Rep/Cap 质粒 | |
| ③ Helper 质粒(腺病毒辅助基因) | |
| 慢病毒 | 三质粒或四质粒体系: |
| ① 转移载体(携带目标基因) | |
| ② Gag/Pol(包装蛋白) | |
| ③ Rev(部分体系不用) | |
| ④ VSV-G(包膜蛋白) |
AAV 有 Rep/Cap 和腺病毒辅助基因;慢病毒有 Gag/Pol、Rev 和 VSV-G。体系完全不同。
3. 病毒释放方式不同(直接影响收毒方式)
| 病毒 | 释放方式 | 产毒后收获方式 |
| AAV | 大量病毒滞留在细胞内(>90%) | 需要 冻融细胞 释放病毒或裂解细胞取毒 |
| 慢病毒 | 大多数释放到培养上清 | 直接收取上清即可,无需裂解细胞 |
AAV 要收细胞,慢病毒收上清。
4. 包膜结构不同 → 稳定性差异
| 病毒 | 是否有包膜 | 稳定性 |
| AAV | 无包膜 | 更稳定,可冻融多次 |
| 慢病毒 | 有包膜 | 易灭活,冻融降低滴度明显 |
AAV 主要滞留在细胞内,需要裂解细胞取毒;
慢病毒主要释放到上清,直接收上清即可。
两者的包装体系完全不同(AAV:Rep/Cap/Helper;慢病毒:Gag/Pol/Rev/VSV-G)。
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