AAV + shRNA 是什么

AAV（Adeno-associated virus，腺相关病毒）是一种常用的基因递送工具，具有高安全性、低免疫原性、可长期表达等优势。
shRNA（short hairpin RNA）是一种利用 RNA 干扰（RNAi）机制实现基因敲低的工具。

当你把 shRNA 序列装入 AAV 载体中后，就形成了 AAV-shRNA 病毒 —— 一种用于稳定敲低靶基因表达的体内或体外工具。

🔧 AAV + shRNA 的工作机制

1. AAV 将 shRNA 表达盒递送到细胞中
   （常见启动子：U6、H1）

2. shRNA 在细胞核内转录成带发夹结构的 RNA

3. shRNA 被 Dicer 裁剪成 siRNA

4. siRNA 与 RISC 复合体结合，识别靶 mRNA

5. 靶 mRNA 被降解 ⇒ 实现基因敲低（knockdown）

📌 AAV-shRNA 的应用场景

🧪 体内实验（in vivo）

• 小鼠/大鼠组织特异敲低基因

• 慢性疾病模型研究（代谢、神经、心血管等）

• 用于不适合 CRISPR 的组织或需要温和敲低的模型

🧫 体外实验（in vitro）

• 细胞系稳定敲低

• 初级细胞/难转染细胞的基因沉默

• 长期实验需要稳定靶基因降低

📈 AAV-shRNA 的优点

✔ 安全性高（不整合基因组）

✔ 适合体内长期表达

✔ 组织特异性强（通过血清型 + 启动子叠加控制）

✔ 对难转染细胞仍有效

❗ 注意事项（非常关键）

1. 序列设计要谨慎

• shRNA 序列要确保特异性

• 避免 off-target

• 同时建议设置 scramble（对照组）

2. 启动子选择影响敲低效率

• U6/H1：经典 Pol III 启动子 → 表达强

• 某些组织可使用 tRNA-shRNA、miR30-shRNA 以减少毒性

3. AAV 血清型决定靶组织

例如：

• AAV9：心脏 / CNS

• AAV8：肝脏

• AAV-PHP.eB：中枢系统（部分小鼠品系有效）

4. 敲低效果出现时间

• 体外：约 3–5 天

• 体内：2–3 周达到稳定表达

5. 不适合用 AAV-shRNA 的情况

• 需要完全敲除（knockout）

• 需要非常精确的调控（可以考虑 CRISPRi）