四质粒包装系统是目前较为常用、且安全性更高的慢病毒生产体系。它将病毒的关键功能分离到 4 个独立质粒中，以降低重组生成复制型病毒的风险，并提高包装效率。
📌 四个质粒分别是什么？
1. 转移载体（Transfer Plasmid）
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含有 目的基因表达框（GOI）
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由 LTR–ψ 包装信号–启动子–GOI 等结构组成
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决定最终感染细胞会表达什么基因（如 GFP、shRNA、CRISPR 元件）
2. Gag/Pol 质粒
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提供病毒核心结构蛋白 Gag
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提供逆转录酶、整合酶等酶类 Pol
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是病毒构建“骨架”的必要成分
3. Rev 质粒
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编码 Rev 蛋白
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促进未完全剪接的病毒 RNA 从细胞核输出
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使病毒基因能够正常表达并完成包装
4. 包膜质粒（Envelope Plasmid）
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最常用：VSV-G（增强稳定性、广泛宿主范围）
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也可替换为其他包膜蛋白实现组织特异性
🧪 四质粒系统的优势
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安全性更高：关键基因分散在多个质粒，交叉重组概率更低
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适用范围广：可搭配各种转移载体（shRNA、gRNA、ORF 等）
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高滴度：常用于科研级和 GMP 级慢病毒生产流程
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