慢病毒上清培养超过 72 小时再收毒，通常会带来以下影响：
1. 病毒滴度明显下降
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HEK293T 等包装细胞在转染 48–72 h 时病毒产量最高。
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超过 72 h 后细胞状态变差、代谢下降，导致病毒颗粒产量减少。
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上清中的慢病毒在 37℃、含血清环境下稳定性有限，会逐渐失活。
2. 容易出现病毒降解或失活
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长时间暴露在培养基中，pH 变化、蛋白酶释放等都会加速病毒失活。
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特别是 96 h 以上，功能滴度可能下降 30–70%。
3. 细胞死亡增加，杂质更多
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过长时间培养会导致大量细胞脱落、破裂。
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上清中会混入更多细胞碎片、DNA、蛋白等杂质，后续过滤更困难。
4. 可能影响病毒的感染活性
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即使总滴度不低，功能滴度（IFU）也会明显下降，使感染效果变差。
实际操作建议
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最佳收毒时间：48 h + 72 h 两次收集最适合。
如果必须延长时间（如无法及时处理），建议：
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补充少量新鲜完全培养基（10–20%）
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保持细胞状态良好
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上清收集后立即 4℃ 保存并尽快超滤/浓缩或-80℃冻存
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