报告基因质粒构建aav

一、什么是“报告基因 AAV 质粒”

报告基因 AAV 质粒是将报告基因表达盒克隆进 AAV 转移质粒（ITR–ITR）中，用于后续 AAV 病毒包装和体内/体外示踪。

主要用途：

• 判断 AAV 是否成功感染

• 评估启动子活性

• 进行细胞/组织特异性示踪

• 验证 Cre / Flp 重组系统是否生效

二、报告基因 AAV 质粒的基本结构

一个标准 AAV 报告基因质粒一般包含以下元素：

ITR ─ 启动子 ─ 报告基因 ─ （WPRE） ─ polyA ─ ITR

三、构建关键注意点（重点）

1.总长度控制在 4.7 kb 以内

• 超长会导致滴度下降、表达不稳定或部分包装
• 构建时应逐项计算长度

2.荧光蛋白选择

• 表达太强可能引起细胞毒性或沉默
• 启动子和血清型匹配比亮度更重要

3.条件表达体系提前设计

• Cre / Flp 特异性示踪需 DIO/FLEX 架构
• loxP/lox2272 排列方向必须正确

4.注意科研质粒与 AAV 表达质粒差异

• 普通 pcDNA3.1 表达盒不能直接替换 ITR
• 元件冗余或 ITR 损伤都会导致失败

四、典型应用场景

• AAV 血清型筛选

• 给药途径比较（IV / ICV / 局部注射）

• 感染效率验证

• 组织特异性表达确认

• Cre 转基因小鼠示踪

⚠️ 几乎所有 AAV 功能实验，第一步都是报告基因构建和验证

报告基因 AAV 质粒的核心在于：ITR 完整、长度可控、启动子匹配、结构简洁 构建是否合理，直接决定 AAV 滴度、表达效率和实验成败。