一、AAV 衣壳（Capsid）是什么？
AAV 衣壳是包裹在 AAV 病毒最外层的蛋白外壳，主要由 VP1 / VP2 / VP3 三种结构蛋白按固定比例组装而成（约 1:1:10）。
1.衣壳的核心作用
决定感染谱（tropism）
- 不同血清型（AAV2、AAV5、AAV8、AAV9 等）的衣壳蛋白不同 → 识别的细胞受体不同 → 组织/细胞偏好不同
介导病毒入胞与核转运
- VP1 区域含 PLA2 结构域，参与内体逃逸
影响免疫原性
- 衣壳是机体产生中和抗体的主要靶点
影响体内表达效率与持久性
二、什么是 AAV 空壳病毒（Empty Capsid）？
空壳病毒是指：结构完整的 AAV 衣壳，但内部不含目的基因（不含 ssDNA 或 scDNA）
在 AAV 包装过程中，衣壳蛋白可以正常组装，但未成功装入基因组，就会形成空壳。
三、空壳 vs 实心壳（Full Capsid）
| 项目 | 空壳病毒 | 实心病毒 |
| 是否含目的基因 | ❌ 不含 | ✅ 含 |
| 是否能表达基因 | ❌ 不能 | ✅ 能 |
| 结构 | 与实心壳几乎相同 | 完整 |
| qPCR 能否检测 | ❌ 检不出 | ✅ 可检测 |
| ELISA/衣壳检测 | ✅ 可检测 | ✅ 可检测 |
| 生物学活性 | ❌ 无功能 | ✅ 有功能 |
👉 所以你会看到：vg/mL 低，但 capsid/mL 或 GC/mL 看起来不低
四、为什么会产生大量空壳？
常见原因包括：
1. 载体设计问题
-
插入片段接近或超过 AAV 4.7 kb 包装上限
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ITR 结构异常或不完整
-
强二级结构，影响基因装载
2. 包装体系问题
-
Rep / Cap 表达比例不合适
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Rep 活性不足，基因复制效率低
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转染条件不稳定（PEI 比例、细胞状态）
3. 生产工艺因素
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包装时间过短
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细胞应激或死亡
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纯化方法无法有效区分空壳与实心壳
五、空壳多有什么影响？
1.对科研实验的影响
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实际有效感染剂量被“稀释”
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表达效率低、不稳定
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实验重复性差
2.对体内实验 / 临床的风险
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增加 免疫反应
-
消耗中和抗体配额
-
提高给药剂量但不增加疗效
👉 临床级 AAV 对 空壳比例 要求非常严格
六、如何降低空壳比例？
常见优化策略包括：
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优化载体长度与结构（<4.7 kb）
-
调整 Rep / Cap 比例
-
使用高效包装系统（如改良型 triple-plasmid system）
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延长合适的包装时间
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采用 CsCl 或 AEX 等可区分空壳的纯化方法
-
增加空壳/实心壳比例检测（AUC、TEM、SEC-MALS）
关于派真
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