AAV 包装与病毒收集常见问题（客户 FAQ）

Q1：AAV 包装后，病毒会直接释放到培养上清中吗？

不会完全释放。

AAV 在包装过程中，大部分病毒颗粒滞留在细胞内（约 70–90%），只有少量释放到培养上清中。因此，仅收集上清通常会导致病毒总产量偏低。

Q2：AAV 病毒收集时一定需要冻融吗？

不一定，但科研阶段通常会使用冻融。

是否冻融取决于对病毒产量、纯度及应用场景的要求：

• 科研级 AAV：
  常采用细胞 + 上清联合收集，并进行 2–3 次冻融，以释放细胞内病毒，提高总滴度。

• 高质量或规范化生产：
  一般不推荐冻融，而采用酶法或温和裂解方式，以减少杂质。

Q3：冻融处理的主要目的是什么？

冻融的主要作用是：

• 破坏细胞结构

• 释放细胞内 AAV 病毒颗粒

• 提高病毒总回收量

Q4：冻融处理是否会影响 AAV 质量？

会带来一定影响。冻融虽然能提高产量，但同时可能：

• 增加宿主蛋白（HCP）残留

• 增加宿主细胞 DNA 杂质

• 提高后续纯化难度

因此冻融更适用于科研用途，而非对质量要求极高的应用。

Q5：AAV 一般需要冻融多少次？

通常建议 2–3 次冻融循环（−80 ℃ ↔ 37 ℃）。

冻融次数过多：

• 不会显著提高产量

• 反而可能增加杂质或影响病毒稳定性

Q6：是否可以只收集上清、不进行冻融？

可以，但需接受以下结果：

• 病毒杂质相对较少

• 病毒滴度明显低于全量收集方式

适用于：

• 早期功能验证

• 对滴度要求不高的实验

Q7：临床前或 GMP 级 AAV 生产还会用冻融吗？

通常不会。在临床前或 GMP 生产中，更常采用：

• 核酸酶（如 Benzonase）辅助裂解

• 温和化学裂解

• 机械裂解方式

以实现病毒充分释放 + 杂质可控，满足质量和法规要求。

Q8：AAV 冻融操作是否适用于所有病毒载体？

不适用。冻融主要用于 AAV 等非包膜、以细胞内为主的病毒。

对于慢病毒等包膜病毒，冻融反而可能破坏病毒结构，不推荐使用。