本 FAQ 面向科研用户，汇总 AAV 在基因敲低（Knockdown）与基因过表达（Overexpression）应用中的常见问题，帮助您更高效地设计与开展实验。
Q1：AAV 可以实现真正的基因敲除（Knockout）吗？
AAV 本身不具备基因编辑能力，无法直接实现基因敲除（KO）。AAV 敲低是通过 shRNA 或 miRNA 抑制靶基因 mRNA 表达，从而降低蛋白水平。如需 KO，通常需结合 CRISPR/Cas9 系统。
Q2：AAV 敲低通常采用哪种策略？
目前最常用的是：
- AAV-shRNA
- AAV-miRNA（miR-shRNA）
其中，miRNA 架构更接近内源性调控机制，体内实验毒性更低、稳定性更好，更适合长期敲低研究。
Q3：为什么 AAV-shRNA 可能会产生毒性？
shRNA 表达过强时，可能饱和细胞内 miRNA 加工通路，从而影响细胞正常功能。通过降低表达强度或采用 miRNA 架构，可有效降低相关风险。
Q4：AAV 敲低多久可以看到效果？
- 体外实验：通常 3–7 天可检测到敲低效果
- 体内实验：约 2–4 周达到稳定敲低水平
Q5：AAV 敲低效率不理想，可能原因有哪些？
常见原因包括：
- 靶序列设计不佳
- 启动子选择不合适
- AAV 血清型与目标组织不匹配
- 病毒剂量不足
建议同时设计多条靶序列，并进行小规模预实验筛选。
Q6：AAV 过表达的最大基因长度是多少？
AAV 的最大包装容量约为 4.7 kb（包含 ITR）。若目的基因较大，可考虑截短版本或采用 Dual AAV 双载体拼接策略。
Q7：为什么 AAV 过表达在体内表达较慢？
AAV 为单链 DNA 病毒，进入细胞后需完成互补链合成，因此体内表达通常在 2–4 周后逐渐稳定，属于正常现象。
Q8：AAV 过表达会整合到宿主基因组吗？
AAV 基因组主要以外源体（episomal）形式存在，整合概率极低，因此安全性较高，适合长期体内研究。
Q9：AAV 过表达没有信号，可能是什么原因？
可能原因包括：
- 启动子在体内发生沉默
- 基因长度接近或超过 AAV 包装上限
- 转录后调控或剪接异常
- 检测时间点过早
Q10：AAV 敲低和过表达哪种更适合我的实验？
- 若研究目标是抑制基因功能，建议选择 AAV 敲低
- 若研究目标是增强或补偿基因功能，建议选择 AAV 过表达
具体方案需结合实验模型、组织类型及研究目的综合评估。
Q11：AAV 表达可以持续多久？
在非分裂或低分裂细胞中，AAV 表达可持续数月甚至数年，非常适合长期功能研究和疾病模型构建。
Q12：是否需要设置对照病毒？
强烈建议设置：
- 阴性对照（Empty vector / Scramble）
- 阳性对照（已验证的靶点或报告基因）
以确保实验结果的可靠性与可重复性。
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