AAV(腺相关病毒)是一种广泛用于基因功能研究和基因治疗研究的递送工具。很多科研用户在委托 AAV 包装服务时,最关心的问题之一就是项目周期需要多久。
一、AAV 包装的标准周期
在不涉及特殊设计或反复优化的情况下,AAV 包装的整体周期通常为 2–4 周。
典型流程与耗时参考
| 阶段 | 内容说明 | 参考耗时 |
| 载体质粒准备 | 客户提供质粒或基因序列 | 6-12天 |
| 病毒包装 | HEK293 细胞三质粒共转染 | |
| 病毒收获与纯化 | 裂解、柱纯化或梯度纯化 | |
| 滴度检测 | qPCR / ddPCR / ELISA | |
| 质量控制与发货 | 无菌、内毒素、封装率(可选) |
- 周期: 1×10¹³ vg以内,极速模式快至6个自然日
- 常规科研级 AAV:11个自然日起
- 高滴度或多项质控项目:约 3–4 周
二、影响 AAV 包装周期的主要因素
1. 是否已有可用表达载体
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客户直接提供合格的 AAV 质粒:周期最短
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需要从头构建载体(克隆、测序):增加 1–2 周
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载体设计复杂或构建失败需返工:周期进一步延长
2. 目的基因长度(Insert Size)
| 插入片段大小 | 对周期的影响 |
| ≤4.5 kb | 常规情况 |
| 接近 4.7 kb 上限 | 包装效率降低,可能需优化 |
| >4.7 kb | 需 Dual AAV 方案,周期明显延长 |
3. AAV 血清型选择
常用血清型(AAV2 / 5 / 8 / 9):流程成熟、周期稳定
特殊或工程化血清型(如 AAV-DJ、PHP.eB):
- 表达和滴度波动较大
- 可能需要重复包装
4. 目标滴度要求
常规科研滴度(~10¹² vg):标准周期
高滴度(≥10¹³ vg/ml):
- 需要放大培养
- 可能合并多批病毒
5. 纯化方式与质控等级
标准科研级:柱纯化 + 滴度检测
高质量科研级:
- 梯度纯化
- 空壳率、内毒素、无菌检测
- 整体周期增加 3–5 天
三、不同项目类型的周期参考
| 项目类型 | 预计周期 |
| 客户自带质粒 + 常规血清型 | 1-2 周 |
| 含载体构建项目 | 2–4 周 |
| Dual AAV 或大基因项目 | 4–6 周 |
| 高滴度 + 全面质控 | 约 4 周 |
四、缩短 AAV 包装周期的建议
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提前确认 ITR 完整性与序列正确性
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合理控制插入片段长度(建议 ≤4.5 kb)
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明确最低可接受滴度范围
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时间紧张项目可提前沟通并行方案
关于派真
作为一家专注于AAV 技术十余年,深耕基因治疗领域的CRO&CDMO,派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付,我们为全球客户提供一站式CMC解决方案,包括从早期概念验证、成药性评估到IIT、IND及BLA的各个阶段。
凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台,我们能将AAV产量提高多至10倍,每批次产量可达1×10¹⁷vg,以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外,我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒(LNP)产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段,从研发到符合GMP的生产,提供端到端的一站式解决方案。