腺相关病毒（AAV）应用问题答疑

1. AAV适合做基因过表达还是敲低？

AAV主要用于基因过表达，也可通过shRNA、miRNA或CRISPR系统实现基因敲低或敲除。

2. AAV的最大包装容量是多少？

AAV最大包装容量约为4.7 kb，超过该长度会降低滴度和转导效率。

3. AAV可以携带荧光标签吗？

可以，如GFP、mCherry、tdTomato等，用于评估转导效率和表达定位。

4. 如何选择AAV血清型？

需根据靶组织、给药方式及物种选择，如AAV9适用于中枢神经系统及全身递送。

5. AAV常见给药方式有哪些？

包括尾静脉注射、脑立体定位注射、肌肉注射及眼内注射。

6. AAV如何保存？

建议-80°C保存，避免反复冻融，推荐分装。

7. 使用前如何处理AAV？

冰上缓慢融化，轻柔混匀，避免剧烈吹打。

8. AAV最佳检测时间？

通常1–2周可见明显表达，3–4周达到稳定表达。

9. 是否需要细胞预实验？

建议进行体外验证，以降低动物实验失败风险。

10. 如何提高AAV表达效率？

优化启动子、提高剂量、选择合适血清型并延长表达时间。

11. 为什么表达效果不理想？

可能与启动子不匹配、血清型选择不当、剂量不足或检测时间过早有关。

12. AAV是否整合到基因组？

主要以游离形式存在，整合概率极低。

13. AAV是否具有免疫原性？

免疫原性较低，但高剂量或重复给药可能引发免疫反应。

14. AAV可以用于CRISPR吗？

可以，通常采用小型Cas9或双AAV系统。

15. AAV与LNP有何区别？

AAV适用于长期表达，LNP适用于短期mRNA递送。