AAV（腺相关病毒）用于基因敲低实验的早期阶段（early phase）FAQ

Q1：AAV敲低实验为什么需要早期验证？

A：早期验证用于确认shRNA序列有效性、载体设计合理性及感染系统匹配性，可显著降低动物实验失败风险，提高整体实验成功率。

Q2：是否可以不做细胞实验直接进行动物实验？

A：不建议。未经体外验证的序列存在较高失败风险。通过细胞水平预筛选，可优先获得高效敲低序列，从而提升体内实验成功率并节约成本。

Q3：早期阶段通常需要设计多少条shRNA序列？

A：建议设计3–5条候选序列，并通过体外实验筛选出1–2条高效序列用于后续AAV构建。

Q4：AAV敲低实验早期阶段包含哪些关键步骤？

A：主要包括：
1）shRNA序列设计与筛选
2）体外敲低效率验证
3）AAV载体构建与优化
4）小规模病毒包装与滴度检测
5）动物预实验（Pilot study）

Q5：如何判断敲低序列是否有效？

A：通常通过qPCR和Western Blot检测：

• mRNA水平下降 ≥70%

• 蛋白水平显著降低
  满足以上条件即可认为序列有效。

Q6：早期阶段是否需要选择AAV血清型？

A：需要。不同血清型具有不同组织嗜性，建议根据目标组织（如脑、肝、心脏等）选择已有文献验证的血清型，以提高感染效率。

Q7：AAV敲低实验多久可以看到效果？

A：AAV表达具有一定延迟：

• 1周：初步感染

• 2–3周：敲低效果出现

• 3–4周：表达稳定

Q8：早期阶段失败的常见原因有哪些？

A：常见原因包括：

• shRNA设计无效

• 未进行体外验证

• 病毒滴度不足

• 启动子选择不当

• 检测时间过早

Q9：完成早期验证后可以直接进入正式动物实验吗？

A：当满足以下条件时可以进入下一阶段：

• 已筛选出高效敲低序列

• 感染效率明确

• 表达时间窗口清晰

• 无明显毒性

Q10：你们是否提供从设计到验证的一体化服务？

A：是的，我们可提供从shRNA设计、载体构建、AAV包装到体内外验证的整体解决方案，帮助客户高效推进项目并降低试错成本。