1. 为什么LNP包封率低？
可能原因：
- N/P比（核酸与脂质比例）不合理
- 包封时pH条件不在最佳范围（通常需酸性环境）
- 微流控混合参数（FRR/TFR）设置不当
- 核酸纯度不足（盐、蛋白残留）
解决方案：
- 优化N/P ratio（通常需实验筛选）
- 控制包封pH（常见pH 4.0左右）
- 调整流速比（FRR）与总流速（TFR）
- 使用高纯度核酸（HPLC级）
2. 为什么LNP粒径偏大或分布不均（PDI高）？
可能原因：
- 混合过程不充分
- PEG-脂质比例不足
- 脂质配方不合理
- 工艺放大导致剪切力变化
解决方案：
- 优化微流控混合条件
- 提高PEG-lipid比例（适度）
- 调整脂质组成（如胆固醇、DSPC比例）
- 放大过程重新建立工艺参数
3. 为什么mRNA/siRNA包封后表达效果差？
可能原因：
- 内体逃逸效率低（ionizable lipid设计问题）
- LNP结构不稳定，释放异常
- 核酸本身设计问题（UTR、修饰等）
解决方案：
- 优化离子化脂质（pKa通常在6.2–6.5）
- 优化配方结构，提高释放效率
- 优化核酸序列设计（如codon优化、修饰）
4. 为什么LNP稳定性差（粒径变大/包封率下降）？
可能原因：
- PEG-lipid脱落（PEG shedding）
- 缓冲体系不稳定
- 储存条件不当
解决方案：
- 优化PEG-lipid结构（C14/C18等）
- 使用稳定缓冲体系（如PBS或Tris）
- 建议：
- 长期：-80°C
- 短期：4°C（数天内）
5. LNP是否可以反复冻融？
不建议。
原因：
- 破坏LNP结构
- 导致payload泄漏
- 粒径增加
建议：
- 小体积分装（Aliquot）
- 避免超过1次冻融
6. 为什么不同批次LNP结果差异较大？
可能原因：
- 脂质原料批次差异
- 工艺参数波动
- 微流控设备差异
解决方案：
- 使用同一批次关键脂质
- 标准化FRR/TFR参数
- 建立稳定的工艺SOP
7. 为什么会出现游离核酸？
可能原因：
- 包封效率不足
- 纯化步骤不充分
解决方案：
- 优化包封条件
- 增加纯化步骤（如TFF、SEC）
8. LNP在体内毒性较高怎么办？
可能原因：
- 离子化脂质毒性偏高
- 剂量过高
- 杂质（内毒素）污染
解决方案：
- 筛选低毒性脂质体系
- 优化给药剂量
- 严格控制内毒素（<5 EU/mL或更低）
9. 为什么体内递送效果不理想？
可能原因：
- 缺乏靶向设计
- 被肝脏优先摄取（ApoE机制）
- 内体逃逸效率低
解决方案：
- 增加靶向配体（如GalNAc等）
- 优化脂质结构
- 针对不同组织开发定制LNP
10. 客户在LNP定制前需要提供哪些信息？
建议提供：
- 核酸类型（mRNA / siRNA / DNA / sgRNA）
- 应用场景（体内 / 体外）
- 靶组织（肝脏、脑、肿瘤等）
- 目标指标（表达量 / 沉默效率 / 粒径等）
- 质量要求（是否GMP、内毒素标准等）
关于派真
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