过去几年，AAV基因治疗的讨论焦点常常集中在“递送”上：如何找到更好的衣壳？如何提高组织靶向性？如何降低免疫原性？如何让更低剂量实现更强疗效？
但随着越来越多管线走向临床与商业化，AAV开发的关键挑战已不再只是“能否递送”，而是能否稳定、精准、可放大、可申报地制备高质量载体。ASGCT 2026释放出的信号很明确：行业正在从“做出AAV”走向“做精AAV”。
顺应这一产业化升级的趋势，在本届ASGCT 2026上，PackGene（派真生物）围绕AAV产业化中的关键瓶颈提交了6篇Abstract /poster，内容覆盖AAV生产细胞株、高细胞密度转染、下游full capsid富集、残留质粒骨架与宿主细胞DNA控制、Empty/Full检测方法、rcAAV检测参考品、支原体快速检测，以及新型AAV递送安全性设计等多个方向。
这些工作共同揭示出一个越来越清晰的现实：AAV的难题，从来不只在“能不能送到目标组织”。
递送效率、组织靶向性和安全性，依然是行业持续攻关的核心；与此同时，随着更多项目进入临床和更大规模生产阶段，另一个同样关键的问题也被不断放大——能不能把AAV稳定地做出来、精准地做出来、可放大地做出来，并且以可申报的方式做出来。
换句话说，AAV竞争正在进入一个更复杂的阶段：不仅要证明载体“有用”，还要证明它“做得出来、做得稳定、做得足够好”。而这背后真正考验的，已经不只是衣壳设计和递送能力，更是对制造工艺、质量控制和CMC体系的系统化掌控。
一、从基因组完整性到残留核酸控制：AAV质量评价正在走向更深层次
过去评价AAV产品质量，常用指标包括vg滴度、总颗粒数、感染性滴度、空实壳比例等。但ASGCT 2026释放出一个非常明确的信号：仅仅知道一个AAV颗粒是“full capsid”还不够，关键要知道里面装的到底是不是正确、完整、可表达的治疗基因组。
如果说“装得对”是为了保证疗效，那么“没装错杂质”则是为了守住安全底线。顺应这一更高维度的质控要求，PackGene在本届ASGCT 2026提交的Abstract #267，进一步将AAV质量控制的关注点从“是否装入完整治疗基因组”延伸到“是否共包装了不应存在的核酸杂质”。该研究聚焦rAAV生产过程中可能发生的残留质粒骨架序列和宿主细胞基因组DNA（host cell DNA, hcDNA）共包装问题。对于AAV产品而言，这类被衣壳包裹的核酸杂质不同于普通游离DNA残留，不能通过常规核酸酶处理去除，因此也是重要的CQA风险点。
在该研究中，PackGene系统比较了四类上游工程化策略，以降低质粒骨架DNA被包装进入AAV衣壳的风险，包括TelN/TelROL切除、I-SceI meganuclease消化、CRISPR/Cas9切割，以及Cre/LoxP重组系统。结果显示，TelN/TelROL和I-SceI分别可将被包装的质粒骨架DNA降低至基线水平的20–30%和20–40%；CRISPR/Cas9进一步将其降低至10–20%；其中Cre/LoxP系统表现最为突出，可在维持稳定滴度的同时，将可检测的质粒骨架DNA降至不可检出水平。
此外，针对生产过程中因宿主细胞凋亡导致的hcDNA片段化和共包装风险，PackGene通过在培养体系中加入信号通路抑制剂，将hcDNA污染降低至基线水平的1–5%。这项研究提示，AAV质量控制不能只依赖下游去除杂质，而应当将风险控制前移到上游工艺设计阶段，通过减少核酸杂质产生和共包装的机会，从源头提高rAAV产品纯度和安全性。
如果说PackGene的研究提供的是“如何避免装入杂质”的工艺解法，那么本届大会上的多项其他摘要，则共同揭示了“如何确保装对目标基因”的严峻挑战。 例如， Solid Biosciences的Abstract #2010显示，基因组大小和序列组成会显著影响AAV包装质量；Oxford Biomedica的Abstract #2199提示，不同细胞系和储存条件可显著改变完整基因组比例；Amber Bio的Abstract #1223则指出，传统方法判断为“full particles”的AAV颗粒，并不一定含有真正ITR-to-ITR完整基因组。这些结果共同说明，“满壳”不等于“装对了”，AAV质量评价正在从颗粒层面深入到基因组内容层面。
二、细胞株、高密度转染与放大能力：上游平台决定AAV制造效率
AAV制造成本高、放大难，一个重要原因在于传统三质粒瞬时转染工艺对质粒、转染试剂、细胞状态和放大条件高度敏感。随着临床项目推进到更大规模，行业正在积极探索更稳定、更高产、更可放大的上游平台。
在这一方向上，PackGene的Abstract #130展示了一个覆盖细胞株、上游工艺优化和下游纯化的整合型AAV制造平台。该平台以PackGene自主开发的悬浮HEK293细胞系PCS3.0为基础，结合高细胞密度转染和full-vector富集策略，目标是同时提升生产效率、放大稳定性和产品质量。
在细胞株和放大能力方面，PCS3.0 HEK293细胞系从小规模模型放大至200 L生物反应器，仍能保持稳定的载体生产力和产品质量。研究还进一步评估了wave bioreactor在灌流模式下实现高活细胞密度转染的可行性，为后续临床和商业化规模生产提供了放大基础。
在上游工艺优化方面，PackGene开发了约 1×107 cells/mL水平的高细胞密度瞬时转染工艺，并通过优化补料策略维持细胞特异性生产力和可接受的空实壳比例。结果显示，该工艺在细胞裂解液中实现约 3×1012 vg/mL的高滴度，相比传统低细胞密度工艺显著提升；部分条件下，收获液full capsid比例可达到50%。
这项研究的价值在于，它并不是单点优化某一个工艺参数，而是将自主细胞株、高细胞密度转染、放大模型和后续full capsid富集作为一个连续系统进行开发。这种平台化思路更符合IND申报和GMP生产对工艺一致性、可放大性和质量可控性的要求。
与此同时，ASGCT 2026中多项公开摘要也显示，上游平台升级已经成为AAV制造的重要方向。例如，University of North Carolina的Abstract #2136通过CRISPR knockout筛选开发第二代AAV 生产细胞系；AAVnerGene的Abstract #3015报道了高产悬浮HEK293one细胞系；Mirus Bio的Abstract #1132关注大规模转染复合物稳定性；Minaris的Abstract #1138和FUJIFILM的Abstract #1128则分别展示了plasmid-free平台和可诱导生产细胞系的可能性。
这些工作共同说明，AAV上游工艺竞争已经不只是“哪个条件产量更高”，而是进入了细胞平台、转染体系、培养模式、放大策略和质量属性联动优化的新阶段。
三、从纯化到full capsid富集：下游工艺正在成为AAV质量提升的关键抓手
如果说上游决定“产得多不多”，下游则决定“产品够不够纯、够不够稳定、能不能达到申报要求”。AAV下游工艺尤其复杂，因为产品中存在空壳、半空壳、部分包装、宿主细胞蛋白、宿主细胞DNA、残留质粒DNA、聚集体等多类杂质。
PackGene在Abstract #130中也重点展示了其下游full-vector富集策略。该研究开发并优化了一套两步阴离子交换层析（two-step AEX）工艺，通过buffer筛选和A260/A280比值指导的组分收集，实现对full capsid的进一步富集，并使用AUC对载体组成进行确认。
与传统单步AEX方法相比，PackGene的两步AEX策略显著提升了full capsid纯度，同时保持较高产品回收率。这一结果表明，下游纯化不应只被理解为“去除杂质”，而应成为主动优化AAV关键质量属性的重要工具。对于需要高剂量给药的AAV项目而言，提高full capsid比例、降低空壳和异常包装颗粒负担，不仅有助于提高有效剂量利用率，也可能降低免疫相关风险和生产成本。
更重要的是，PackGene将下游full-vector富集与上游PCS3.0细胞系、高细胞密度转染工艺放在同一平台中协同开发，体现了AAV CMC开发中越来越重要的整体性思维：上游、下游和分析方法不能割裂优化，而需要围绕最终产品质量属性进行端到端设计。
从行业整体看，下游工艺也正在向连续化、强化化和PAT驱动方向发展。Regeneron的Abstract #40展示了从harvest到drug substance的连续纯化流程；Tosoh的Abstract #41报道了基于choline的AEX polishing方法；Oxford Biomedica的Abstract #43则显示，AEX不仅影响full/empty separation，也可能影响capsid deamidation等其他质量属性。
这些结果共同说明，AAV下游纯化正在从传统“回收产品”的工艺环节，升级为调控full/empty比例、异常包装、聚集体、PTM和产品一致性的核心技术平台。
四、分析方法走向GMP适用：Empty/Full、支原体和rcAAV检测成为质量体系核心
AAV质量控制的难点在于：它既是病毒颗粒，又是核酸药物载体；既要看外壳，也要看内部基因组；既要评估物理属性，也要评估生物效力和安全风险。因此，单一分析方法已经难以满足临床开发和GMP生产需求。
在Empty/Full检测方面，PackGene的Abstract #1217聚焦mass photometry在AAV空实壳比例检测中的GMP适用性。Mass photometry具有样本消耗低、检测速度快、可区分不同颗粒群体等优势，但传统使用大分子蛋白标准品进行仪器校准的方法，并不能充分反映不同AAV血清型颗粒的真实检测需求。
为此， PackGene建立了覆盖六种常见血清型的野生型AAV参考样品，包括AAV1、AAV2、AAV2.7m8、AAV5、AAV8和AAV9。这些参考样品由纯化的empty和full capsids组成，并通过ELISA测定capsid titer、AUC确认Empty/Full比例。研究结果显示，mass photometry能够基于分子量差异成功区分empty、partial和full AAV capsid群体；以empty capsid作为基线时，full capsid的分子量偏移可与payload genome大小形成对应关系。
这一研究为mass photometry建立AAV血清型特异性的系统适用性标准提供了基础，也使其更适合作为GMP级AAV生产中Empty/Full ratio检测的高通量工具。对于AAV工艺开发和放行检测而言，这类参考品和方法学资格确认工作，正是从研发检测走向GMP质控的关键一步。
除了Empty/Full比例，rcAAV检测也是AAV产品安全性评价中的关键项目。PackGene的Abstract #3216针对当前rcAAV检测中常见的特异性不足问题，建立了多血清型特异性的rcAAV参考样品，包括rcAAV2.7m8、rcAAV5、rcAAV6、rcAAV8和rcAAV9。
传统方法常使用野生型AAV作为参考品，但标准REP primer/probe组合容易检测到来自非rcAAV颗粒的REP序列，造成较高背景信号，影响检测特异性。PackGene开发的rcAAV参考品不含GOI插入，更接近AAV三质粒生产平台中潜在复制型污染物的结构特征，并经过基因组滴度、衣壳滴度、感染性滴度、无菌和支原体等多维质控。
结合优化后的RCV primer/probe系统，该方法显著降低了非特异性背景信号，实现了1 rcAAV per 10 vg的检测限。稳定性研究和年度复测也支持这些参考品用于长期检测体系搭建。这一工作为GMP级AAV生产中的rcAAV检测提供了更灵敏、更特异、更接近实际工艺风险的解决方案。
在CGT产品放行检测中，支原体检测同样是影响生产周期和产品放行效率的重要质量项目。PackGene的Abstract #3215展示了ACCUBOX Mycoplasma Detection Kit，一种无需核酸提取的RT-qPCR支原体快速检测方法。
传统培养法虽然被视为“金标准”，但检测周期长达28天，难以满足细胞与基因治疗产品快速放行需求；常规NAT方法虽然缩短了时间，但往往依赖磁珠提取流程，耗时约7小时，且容易引入操作差异。PackGene开发的ACCUBOX方法通过专有MycoLysis Buffer省去传统提取步骤，将样本前处理缩短至约25分钟，并采用一步法RT-qPCR同时靶向DNA和RNA，覆盖277种mycoplasmas、spiroplasmas和acholeplasmas。
研究结果显示，利用RNA高丰度优势，双靶标策略相比传统DNA-only方法灵敏度提升5–10倍；对10种支原体参考菌株在10 CFU/mL水平实现100%检出，在约1 CFU/mL极限水平实现超过95%检出，并在5 copies/test水平实现补充DNA检测100%通过。同时，该方法未观察到与常见工程细胞系、环境DNA或相关细菌物种的交叉反应，并按ChP、USP、EP和JP药典要求完成验证。
与此同时，ASGCT 2026中其他公开摘要也显示，长读长测序、multiplex PCR、dPCR/ddPCR、FFF-MALS-DLS、整合位点检测等方法正在共同构建更完整的AAV质量画像……
五、从研发到IND：AAV项目需要同时前置CMC、安全性和剂量设计
值得强调的是，AAV产品能否走向临床，不仅取决于制造质量，也取决于载体设计能否在疗效与安全性之间取得更优平衡。PackGene在Abstract #2414中展示了一项围绕AAV递送安全性和空间表达控制的研究，试图通过新型肌肉靶向性衣壳、组织特异性启动子和miRNA调控元件的组合，降低系统给药中的肝毒性风险。
该研究使用一种高风险治疗模型：通过AAV体内递送靶向CD19/CD3的bispecific T-cell engager（BiTE），并在人源化B-NDG小鼠Raji-Luc淋巴瘤模型中评价抗肿瘤疗效和安全性。研究系统比较了AAV9与PackGene工程化肌肉靶向性衣壳AAV.eM，以及CAG广谱启动子、MHCK7肌肉特异性启动子、miR-208a结合位点和不同给药路径的组合。
结果显示，静脉给药AAV.eM-MHCK7-BiTE能够实现强效肿瘤控制和更优生存获益，而AAV9-MHCK7未能有效控制疾病；相比之下，AAV9-CAG-BiTE则出现明显肝脏蓄积和致死性肝毒性。进一步加入miR-208a结合位点后，可在不削弱系统性BiTE水平和抗淋巴瘤疗效的情况下，几乎消除心脏表达。更重要的是，在肌肉注射路径下，AAV.eM-MHCK7在降低10倍剂量至 5×1011 vg/kg时，仍能维持完全肿瘤清除，并表现出显著高于AAV9的肌肉特异性mRNA表达。
这项研究说明，AAV开发中的“剂量、安全性和制造”并不是彼此独立的问题。更高效、更精准的组织递送和表达控制，有可能降低所需治疗剂量；而剂量降低又会反过来减轻制造压力、降低杂质负荷、减少免疫和毒性风险，并改善未来商业化可及性。因此，对于AAV项目而言，CMC前置与载体工程、安全性设计需要同步考虑。
结语、PackGene如何支持高质量AAV载体开发与GMP生产
从ASGCT 2026可以看到，AAV产业已经走过了“证明可行”的阶段，正在进入“证明可控”的阶段。
过去，行业关注的是：这个AAV能不能递送？能不能表达？能不能看到疗效信号？
现在，越来越多项目必须回答更现实的问题：能不能稳定生产？能不能规模放大？能不能控制空壳、异常包装和残留杂质？能不能建立足够灵敏、可靠、GMP适用的检测体系？能不能经得起IND申报和临床开发中的质量审查？
PackGene在本届ASGCT 2026提交的6项研究，正是围绕这些问题展开：
Abstract #130展示了基于PCS3.0 HEK293细胞系、高细胞密度转染和两步AEX full-vector富集的整合型AAV制造平台；
Abstract #267通过Cre/LoxP、CRISPR/Cas9、TelN/TelROL、I-SceI和caspase inhibitor等策略，从上游降低质粒骨架DNA和hcDNA共包装风险；
Abstract #1217建立多血清型AAV参考样品，用于mass photometry Empty/Full检测方法的系统适用性确认；
Abstract #3215开发无提取RT-qPCR支原体快速检测方法，支持CGT产品过程控制和快速放行；
Abstract #3216建立多血清型rcAAV参考品，提高rcAAV检测灵敏度和特异性；
Abstract #2414通过AAV.eM衣壳、组织特异性启动子和miRNA调控元件组合，探索降低系统性AAV治疗肝毒性和治疗剂量的新策略。
这些摘要共同体现了PackGene围绕AAV开发全链条的系统化布局：从载体设计、细胞株开发、上游生产、下游纯化，到质量分析、安全性检测和GMP生产支持，核心目标都是帮助AAV项目从“造得出”走向“造得精”，从早期研发走向临床申报和未来商业化。
AAV产业的下一场竞争，不只是“谁的递送更强”，也是“谁能把复杂的载体稳定、精准、可控地生产出来”。
PackGene愿与全球创新团队一起，把优秀的科学创意，推进为经得起工艺、质量与监管检验的基因治疗产品。
本文内容整理自ASGCT 2026大会公开摘要，仅供学术交流与信息参考。
关于派真
作为一家专注于AAV 技术十余年，深耕基因治疗领域的CRO&CDMO，派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付，我们为全球客户提供一站式CMC解决方案，包括从早期概念验证、成药性评估到IIT、IND及BLA的各个阶段。
凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台，我们能将AAV产量提高多至10倍，每批次产量可达1×10¹⁷vg，以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外，我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒（LNP）产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段，从研发到符合GMP的生产，提供端到端的一站式解决方案。
