
实验动物分组要根据实验目的来设计,一般会有对组照、实验组等划分。例如过表达某一个目的基因的AAV动物实验中,会至少设计两组:对照组(注射PBS,或者只含有表达盒但不带目的基因的AAV),以及实验组(含目的基因或序列表达盒)。如果希望能以荧光跟踪观察到AAV感染组织或范围,还可以加入表达荧光蛋白的荧光对照组。(相同血清型、启动子)
在设计正式动物实验时,为了使实验数据具有较好的统计意义,通常设定每组动物的个数至少是5个,考虑到动物可能发生意外死亡,6个以上为佳。当然,小鼠数目越多,结果可信度会越高,这在实验结果超出预期范围时尤为重要。
举例
为了获得最好的实验结果,可以在确定注射部位、注射方法后,通过设计一系列浓度梯度确定最适注射剂量。一般也可以根据查找文献来确定实验所用的AAV血清型、注射方法、病毒量、检测时间等实验参数,根据获得的文献依据,做一些预实验来确定。如果要探索血清型的靶向部位、目的基因表达效果,也可以采用一些实验方法来研究。例如,为了探索AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9血清型的转基因表达和生物分布,通过巨细胞病毒荧光素酶转基因与AAV重组表达,进行动物成像、小鼠荧光素酶表达的定量分析、荧光素酶蛋白活性等方法,确定了这些血清型在小鼠体内的靶向部位。
总之,预实验就是迷你版的正式实验,希望研友们在进行预实验的时候一定要尽可能地查阅相关资料与文献,准备周全后这样才能更快地推进正式实验。
关于派真
作为一家专注于AAV 技术十余年,深耕基因治疗领域的CRO&CDMO,派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付,我们为全球客户提供一站式CMC解决方案,包括从早期概念验证、成药性评估到IIT、IND及BLA的各个阶段。
凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台,我们能将AAV产量提高多至10倍,每批次产量可达1×10¹⁷vg,以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外,我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒(LNP)产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段,从研发到符合GMP的生产,提供端到端的一站式解决方案。
