慢病毒载体进行基因过表达,构建稳转细胞株,研究己糖激酶在前列腺癌(PCa)中的作用

2024年9月24日
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  1. 什么是慢病毒

慢病毒是以HIV-1为基础改造而来的一种病毒载体。在数十年的应用中,慢病毒载体的生物安全性和有效性不断被提升,目前已经成为体内外生物实验中一种功能非常强大的基因递送工具。

在基因递送方面,慢病毒载体拥有诸多独特的优势:稳定持久表达、可感染多种类型细胞、可携带大片段基因、免疫原性比较低等。无论是基础科研还是临床应用,慢病毒载体都具有非常广泛的应用前景。

  1. 慢病毒的应用场景

目前慢病毒载体主要应用在以下几个方面:

  • 细胞基因治疗(已上市的CAR-T产品有9款采用了慢病毒载体递送CAR基因)
  • 基因表达调控(过表达、RNA干扰研究等)
  • 基因编辑(CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选、基因敲除、敲入、点突变、基因激活/抑制)
  • 稳转细胞株构建
  • 活体细胞成像追踪
  • 转基因动物

图1 慢病毒载体的主要应用方向

 

细胞代谢在肿瘤进展中起着关键作用,靶向癌症代谢可能有效地杀死癌细胞。本文旨在研究己糖激酶在前列腺癌(PCa)中的作用,并确定PCa治疗的关键靶点。

实验设计和主要研究结果:

(1)癌症基因组图谱(TCGA)数据库和在线工具评估结果显示ADP依赖型葡萄糖激酶(ADPGK)是唯一一种在前列腺腺癌(PRAD)中上调并预测较差总生存(OS)的葡萄糖激酶。临床样本分析显示,与非PCa组织相比,DPGK在PCa组织中显著上调。

(2)ADPGK过表达促进了PCa细胞的增殖和迁移,而敲低ADPGK则抑制了恶性表型。

(3)代谢组学、蛋白质组学以及ECAR和OCR测试揭示了ADPGK显著加速了PCa的糖酵解。

(4)ADPGK与丙酮酸激酶C(ALDOC)结合,通过AMP激活蛋白激酶(AMPK)磷酸化促进糖酵解。

图2 用于ADPGK过表达的慢病毒结构示意图及ADPGK过表达结果

 

载体信息 LV-ADPGK
感染细胞 PC3M, PC3,22Rv1
调控方式 过表达ADPGK,构建稳定表达ADPGK的细胞株

派真生物有幸为以上研究提供慢病毒。

关于派真

作为一家专注于AAV 技术十余年,深耕基因治疗领域的CRO&CDMO,派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付,我们为全球客户提供一站式CMC解决方案,包括从早期概念验证、成药性评估到IITINDBLA的各个阶段。

 

凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台,我们能将AAV产量提高多至10倍,每批次产量可达1×10¹⁷vg,以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外,我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒(LNP)产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段,从研发到符合GMP的生产,提供端到端的一站式解决方案。

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