
是的,AAV(腺相关病毒)在冻融过程中可能会导致空壳(empty capsids)比例增加。主要原因包括:
1.结构不稳定性:AAV的衣壳在冻融过程中可能受到物理应力的影响,导致部分基因组脱落,形成空壳。
2.冰晶损伤:冷冻和解冻过程中,冰晶的形成可能损伤病毒颗粒,使其基因组泄露。
3.pH和离子浓度变化:冻融可能引起缓冲液的pH值和离子浓度波动,从而影响AAV的稳定性。
4.蛋白聚集:冻融可能导致AAV的衣壳蛋白发生聚集或构象变化,影响基因组的保持。
如何减少空壳增加?
1.添加保护剂。
2.快速冷冻:使用液氮或-80°C速冻,减少冰晶生长时间。
3.避免多次冻融:尽量分装储存,减少冻融循环的次数。
4.使用合适的存储温度:AAV通常建议在-80℃长期储存,短期可在4℃保存,但避免在-20℃存储,以减少反复冻融的影响。
如果你的实验对完整病毒比例要求较高,建议在使用前检测AAV的完整性(如通过qPCR和ELISA测定基因组和衣壳的比例)。
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