在 三质粒慢病毒包装系统(3-plasmid system) 中,目的基因载体(transfer vector)的可装载大小通常为 8–9 kb(含所有元件)。超过这个范围,病毒包装效率会明显下降。
1.三质粒系统的慢病毒最大包装容量
| 内容 | 大小限制 |
| 慢病毒(HIV-1 伪型)理论最大容量 | ~9.0–10 kb |
| 推荐的安全包装大小(有效滴度) | ≤ 8 kb |
| 包含:启动子 + 目的基因 ORF + IRES/P2A(如有)+ 报告基因 + LTR + WPRE 等元件 | 全部计入 |
2.为什么超过 8–9 kb 会降低滴度?
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基因组过大 ➜ 逆转录效率下降
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包装颗粒装载能力有限 ➜ 颗粒数减少
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大载体影响病毒 RNA 稳定性
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滴度会呈指数级下降
3.目的基因 > 8 kb 怎么办?
可选方案:
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拆分包装(Dual-vector system)
如:使用 Cre/LoxP、Intein、2A 分段重组系统。 -
换用 AAV(容量小,但可做双载体拼接)
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换用腺病毒(Ad5:可达 30 kb)
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