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检测腺相关病毒（AAV）体内感染情况通常是为了确认病毒是否成功递送并表达了目标基因。常用方法如下： 🧪 一、荧光/发光信号检测（适用于标记基因如GFP/Luciferase） 1. 小动物活体成像（IVIS） 适用情景：携带GFP、Luc、mCherry等报告基因的AAV。 优点：非侵入、可多次追踪病毒表达动态。 方法： Luc：注射D-luciferin后成像； GFP/mCherry：直接检测荧光信号。 2. 组织切片荧光检测 样本：采集组织器官，制备冰冻切片或石蜡切片。 检测：显微镜下观察报告基因表达。   🧬...

AAV（腺相关病毒，Adeno-Associated Virus）在进行包装（生产）时，通常需要三个关键组分，分别由三个质粒共同转染产生。具体如下： 🧬 AAV病毒包装三大核心组分： 1. 载体质粒（Transfer Plasmid / Vector Plasmid） 含有你想要递送的外源基因（转基因）； 该基因位于两个AAV ITR（Inverted Terminal Repeat）之间； ITR序列是AAV基因组包装和复制所必需的唯一病毒序列。 2. 包装质粒（Packaging Plasmid / Rep-Cap...

慢病毒（Lentivirus）之所以能“发光”，是因为在构建慢病毒载体时，科学家人为地将绿色荧光蛋白（GFP, Green Fluorescent Protein）基因插入到了病毒的基因序列中，并由启动子驱动表达。具体来说：   🧬 为什么慢病毒会发光（表达GFP）？ GFP不是病毒天然携带的基因，而是人工构建的慢病毒载体中添加的标记基因。 当这种携带了GFP的慢病毒感染细胞后，会将其基因组（包括GFP）整合到宿主细胞的DNA中。...

在进行腺相关病毒（AAV, Adeno-Associated Virus）实验时，实验室的生物安全等级（biosafety level, BSL）主要依据以下几个因素确定： 所用的 AAV血清型 是否表达有害基因（如毒素、癌基因等） 动物实验是否涉及体内注射 实验操作是否可能产生气溶胶   🔒 AAV实验常见的实验室生物安全等级： ✅ BSL-1（基础安全等级） 适用于以下情况： 使用 不表达有害基因的AAV载体 血清型为 AAV2 或 AAV-DJ 等不具有强组织穿透性 实验为体外操作（如细胞转导），无气溶胶产生风险...

AAV（腺相关病毒，Adeno-Associated Virus）的包装容量理论上是约 4.7 kb（4700 个碱基），这是其自然病毒衣壳所能容纳的最大单链 DNA 大小（包括 ITRs 在内）。超过这个大小，包装效率会迅速下降，病毒颗粒的质量也会变差，甚至无法形成有效的感染性颗粒。 是否能包装超过 4.7 kb 的序列？ 1. 4.7~5.2 kb 范围内： 勉强可以包装，但滴度会明显降低。 病毒颗粒不稳定，基因表达效率低。 可能存在截断或重组风险。 2. 超过 5.2 kb： 极难包装成功。...

常见AAV包装服务规格 1. 病毒滴度（Titer） 物理滴度（vg/mL，viral genomes/mL）：用qPCR或ddPCR检测病毒基因组数量。常见范围： 10¹²–10¹³ vg/mL（实验级） ≥10¹³ vg/mL（高滴度精制级） 感染滴度（TU/mL，transducing units/mL）：评估AAV对细胞的实际感染效率，适用于部分实验。 2. 包装体积 常见包装体积包括：100 μL、200 μL、500 μL、1 mL 可根据需求定制。 3. 血清型（Serotype）选择...

慢病毒包装规格主要包括以下几个方面： 项目 规格说明 病毒类型 第三代慢病毒系统，可感染分裂和非分裂细胞 包装系统 三质粒或四质粒系统，分别包含包装质粒（psPAX2）、包膜质粒（pMD2.G）和目标载体质粒 滴度单位 TU/mL（传染单位），或GC/mL（基因拷贝数） 注：常用TU/mL表示功能滴度 常规滴度 交付滴度≥1E+8 TU/mL，不担心滴度虚高，滴度最高可达1E+10 TU/mL 纯化方式 超速离心浓缩 / PEG 沉淀浓缩 / 层析纯化（可选） 体积规格 100 μL、200 μL、500 μL、1 mL...

AAV（腺相关病毒，Adeno-Associated Virus）是一种常用的基因治疗载体，因其安全性高、免疫原性低而受到广泛应用。 ✅ AAV的装载能力是多少？ AAV的最大装载容量为大约 4.7 kb（4700个碱基），这是指整个病毒基因组长度，包括两端的ITR（Inverted Terminal Repeats）在内。 ITR：每端大约145 bp，总共约290 bp。 因此，留给外源基因及调控元件（启动子、终止子等）的有效空间约为4.5 kb左右。   🚫 超出装载容量会怎样？ 如果插入的外源序列超过4.7...

AAV病毒（腺相关病毒，Adeno-Associated Virus）在体外的存活时间受到多个因素的影响，比如温度、pH值、保存介质和表面材料等。以下是一些常见条件下的参考信息： 1. 在常温（室温，20–25°C）下 溶液中（如PBS或培养基）：通常能稳定存活数小时到几天，但病毒活性会逐渐下降。 干燥状态（如吸附在塑料、玻璃表面）：病毒颗粒可能仍可检测，但活性通常会在数小时内迅速降低。 2. 在4°C冷藏条件下 在缓冲液（如PBS、Tris缓冲液等）中保存，AAV的结构相对稳定，感染活性可维持数周。...

在生命科学研究与药物开发领域，动物模型是揭示人类疾病机制、筛选药物靶点以及评估新药疗效与毒性的重要工具。随着分子生物学技术的不断发展，基因工程技术在动物模型构建中的应用日益广泛。腺相关病毒（Adeno-associated virus，AAV）凭借其高效、安全、低免疫原性以及长期稳定表达等特性，已成为当前基因治疗及动物模型构建中备受关注的重要载体之一。    传统动物模型构建方法及局限性 传统构建动物疾病模型的方法主要包括： 转基因动物：通过原核显微注射技术将外源基因随机或定点整合到胚胎基因组中。...