近年来，终止抗逆转录病毒治疗（ART）后病毒反弹一直是HIV治疗的一大难题。近日，《Science Immunology》发表的一项最新研究，首次展示了通过腺相关病毒（AAV）载体递送针对猴免疫缺陷病毒（SIV）Env蛋白的抗体，能在停药后实现长期病毒抑制，为HIV治疗提供了全新的思路和希望。
当前ART虽然能够有效压制病毒复制，但一旦停药，病毒往往迅速反弹。研究团队认为，通过基因治疗手段，在体内持续表达具有强效中和及能诱导抗体依赖的细胞毒性（ADCC）作用的抗体，或能为患者提供一种无需终生服药的治疗替代方案。正因如此，Klenchin等人利用AAV载体，将两种来源于猕猴的Env特异性抗体（ITS61.01与ITS103.01）递送至SIV感染的猕猴（文章图S2），并观察其在ART终止后的表现。
文章图S2 用于抗体表达AAV载体。ITS61.01、ITS103.01和17-HD9的序列被克隆到AAV载体中，位于CMV增强子、鸡β-肌动蛋白启动子和SV40内含子的下游，以及WPRE和SV40聚腺苷酸化信号的上游。重链和轻链的阅读框通过P2A核糖体跳跃序列和furin切割位点分隔，以便通过蛋白酶作用去除P2A肽。在3’非翻译区（3’UTR）中，还包含了三个miRNA-142T结合位点的串联重复序列，以减少在专职抗原呈递细胞中的非特异表达。为了延长抗体的体内半衰期，增加对新生儿Fc受体（FcRn）的亲和力，在每个抗体的重链中引入了M428L和N434S（LS）突变。此外，还在ITS61.01和17-HD9的C末端添加了视紫红质（C9）标签，用于通过ELISA进行定量。
研究共纳入14只猕猴，这些动物均感染了带有条形码标记的SIVmac239M病毒。在感染后第9天开始，所有动物均接受每日皮下注射ART以抑制病毒复制。待病毒载量被有效控制后，研究组（8只动物）分别通过肌肉注射接受AAV9载体递送ITS61.01和ITS103.01抗体，而对照组（6只动物）则接受了对照抗体17-HD9。
实验过程中，研究团队对动物血浆中抗体浓度、抗药物抗体（ADA）反应、以及病毒反弹情况进行了系统监测。ART持续至60周后停止，随后动物们被频繁检测病毒载量，评估抗体持续表达对病毒反弹的影响。
文章图1 AAV递送针对SIV Env的抗体可延缓SIVmac239M感染猕猴的病毒反弹。(A)十四只猕猴通过静脉注射带有条形码的SIVmac239M（5000 IU）进行感染。从感染后第9天至第60周（灰色区域），所有动物接受每日一次的皮下注射抗逆转录病毒治疗（ART），治疗方案包括多替拉韦（2.5 mg/kg）、富马酸替诺福韦酯（5.1 mg/kg）和恩曲他滨（40 mg/kg）。在感染后第34周，八只动物接种了编码针对SIV Env的特异性抗体ITS61.01和ITS103.01的AAV9载体（浅红色、橙色和栗色），另外六只动物接种了编码对照抗体17-HD9的载体（蓝色）。使用定量RT-PCR检测血浆中的病毒RNA载量，检测阈值为15拷贝/mL（虚线）。每份样本的检测值为六个重复反应的平均值。灰色区域表示ART治疗期。(B) 治疗组（n = 8）和对照组（n = 6）中无病毒血症动物（<15 SIV拷贝/mL）的百分比差异（P < 0.005，Mantel-Cox检验）。
该研究首次证明，通过AAV载体实现Env特异性抗体的持续表达，可以在ART终止后有效遏制SIV的病毒反弹。这一成果不仅为动物模型中的HIV治疗带来了突破性进展，也为未来在人体内利用类似基因治疗策略实现ART终止后的长期病毒控制提供了理论依据和技术支持。未来，如何优化抗体组合与递送方案，以及克服病毒逃逸问题，将成为研究的重要方向。
总之，AAV介导的Env抗体传递为阻断病毒反弹提供了全新策略。通过持续表达高效抗体，不仅显著延长了猕猴体内的无病毒状态，也为探索终止ART后的长期病毒控制奠定了坚实基础。点击文末“阅读原文/Read more”，即可查阅完整论文，了解更多实验细节与数据支持。