慢病毒包装系统通常需要以下几种质粒和细胞来完成包装过程:
1. 质粒
慢病毒包装系统一般需要三个或四个质粒,通常包括以下几种:
- 载体质粒:含有目标基因和慢病毒的长末端重复序列(LTRs)。这个质粒包含目标基因的表达框架,通常是人们需要转染到目标细胞中的基因。
- 包装质粒:提供病毒结构蛋白和功能蛋白,例如 Gag、Pol 等。这些蛋白质是病毒复制和组装的必要组件。
- 外壳质粒(包膜质粒):编码病毒包膜蛋白 VSV-G(病毒性出血热病毒糖蛋白),使慢病毒可以感染广泛的宿主细胞。这是常用的包膜蛋白,其他的包膜蛋白也可以用于特定的细胞靶向。
- 辅助质粒(可选):有些包装系统使用额外的质粒来提高包装效率和病毒的稳定性,例如 Rev 质粒。Rev 是一种辅助蛋白,可以提高病毒 RNA 的运输效率。
在一些慢病毒系统中,包装和辅助功能可能集中在一个质粒上,因此只需要三个质粒即可。
2. 细胞
慢病毒包装细胞系是提供病毒包装所需蛋白的主要平台。常用的细胞系是:
- 293T 细胞:一种 HEK293 细胞的变异株,含有 SV40 大 T 抗原,能高效表达外源基因。293T 细胞特别适合于慢病毒包装系统,因为它们易于转染,且能高效表达病毒蛋白。
包装过程概述
一般来说,将上述质粒按特定比例共转染到 293T 细胞中,经过一段时间的培养(通常48-72小时),细胞培养上清中会分泌出病毒颗粒。之后,通过滤过或浓缩等步骤即可收集到重组慢病毒颗粒,用于后续感染目标细胞。