1、腺相关病毒的主要特征是什么？
腺相关病毒（AAV）是一种无包膜病毒，属于细小病毒科的依赖病毒属。通常认为AAV对人类没有致病性，只有在辅助病毒（如腺病毒或疱疹病毒）存在的情况下才能复制。病毒衣壳蛋白结构决定了病毒感染组织/细胞的能力；已知不同血清型的组织特异性不同。
2、用AAV进行基因递送的优势哪些？
AAV载体通常被认为比腺病毒和逆转录病毒载体更安全。
首先，AAV未被报道会引起任何疾病。结合其复制缺陷的特性，AAV在体内基因递送和作为潜在基因治疗载体方面具有良好的安全性。
其次，重组AAV能够感染包括分裂细胞和非分裂细胞在内的广泛细胞类型，并以串联体的形式存在，实现长期表达。
最后，与其他病毒载体（如腺病毒）相比，AAV在动物模型中引起的免疫反应非常轻微，适合于将基因递送到动物体内（作为一种体内递送工具）。
3、不同AAV血清型的特征是什么？
血清型是根据衣壳结构蛋白的类型进行分类的，它决定了组织的特异性。血清型2（AAV2）是研究最广泛的血清型。AAV2具有广泛的组织感染性，而其它血清型具有更具体的组织感染性，如AAV5能够感染包括中枢神经系统、肝脏和视网膜在内的组织，而AAV6能够感染包括心脏、肌肉和肝脏在内的组织。
4、重组AAV是复制缺陷的吗？
对于野生型AAV，如果没有辅助病毒（如腺病毒）的存在，其复制效率极低。对于现在生产的重组AAV，复制和衣壳基因是在Rep/Cap质粒中提供的。只有AAV基因组的两个ITR（倒置末端重复序列）被保留并包装成病毒颗粒，而所需的腺病毒基因要么是由腺病毒提供的，要么是由另一个质粒提供的。理论上，重组AAV是不可能复制的。
5、使用重组AAV（rAAV）时应采取哪些预防措施？
充分理解AAV载体在实验室使用时的潜在危险和必要预防措施至关重要。由于插入了外源基因，因此rAAV具有潜在的危害性。类似的载体已经被批准用于人类基因治疗试，证明了它们在体内表达基因的潜在能力。由于这些原因，在生产和处理任何rAAV时必须格外小心。
遵循所有涉及重组DNA研究的适用指南。在生产或处理重组AAV时采取适当的安全措施，包括在生物安全柜中操作以及穿戴防护实验室外套、面部保护和手套。
6、AAV可以用于体内实验吗？
可以，AAV适用于体内注射。应选择适当的AAV血清型以达到在目的组织中特异性表达的目的，最好能直接将AAV注射到该组织中。对于体内研究，AAV应采用超速离心等方法进行纯化。
7、重组AAV的克隆能力是多少？
AAV的包装能力大约是4.7Kb。由于AAV的两个ITR（反向末端重复序列）总共约为0.2Kb，因此可以插入这两个ITR之间的外源DNA应该小于4.5Kb。当插入DNA的长度接近最大允许值（4-4.5Kb）时，包装效率会显著降低。以cDNA的基因过表达为例，由于CMV-poly(A)元件大约是1Kb，允许的最大cDNA长度大约是3Kb。如果还需要共表达GFP（来自单独的表达盒），考虑到额外的promoter-EGFP-poly(A)大约是2Kb，GFP共表达系统的最大的克隆能力大约是1.0-1.2Kb。
对于双链AAV（scAAV），其容量是单链AAV（ssAAV）的一半。
8、AAV载体的稳定性如何？应该如何储存？
我们的稳定性研究数据表明，在4°C或更低温度下，纯化的AAV载体非常稳定。所有病毒载体都是在干冰上冷冻运输的，收到后应储存在-80°C中进行长期储存。载体可以储存在-20°C或+4°C一周左右。载体应该尽可能地分装，以避免反复冻融。请至少每管分装10ul，并使用低蛋白结合管以避免病毒的损失。
关于派真
作为一家专注于AAV 技术十余年，深耕基因治疗领域的CRO&CDMO，派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付，我们为全球客户提供一站式CMC解决方案，包括从早期概念验证、成药性评估到IIT、IND及BLA的各个阶段。
凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台，我们能将AAV产量提高多至10倍，每批次产量可达1×10¹⁷vg，以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外，我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒（LNP）产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段，从研发到符合GMP的生产，提供端到端的一站式解决方案。
