如何选择合适的AAV血清型？

选择合适的AAV血清型是实验成功的关键第一步，因为它直接决定了转导效率（感染哪个细胞）、靶向特异性（是否主要感染目标细胞）和免疫原性（是否会被预先存在的抗体中和）。

一、核心原则：根据您的目标细胞/组织类型选择

这是选择AAV血清型的首要和决定性因素。不同的AAV血清型对不同的组织和细胞有天然的“亲和力”（趋向性）。

以下是目前最常用的AAV血清型及其主要靶向组织：

简单总结：

靶向肝脏： 优先考虑 AAV8, AAV9, AAV-DJ。

靶向中枢神经系统： 优先考虑 AAV9, AAVrh10, AAV-PHP.eB/PHP.S（后者是经过工程化、对小鼠血脑屏障穿透性极强的变体）。

靶向视网膜：

• 光感受器细胞：AAV5, AAV8, AAV9。
• 视网膜色素上皮细胞：AAV1, AAV5, AAV8。

靶向肌肉（骨骼肌/心肌）： 优先考虑 AAV1, AAV6, AAV8, AAV9。

靶向肺： 优先考虑 AAV5, AAV6, AAV9。

二、其他关键考量因素（进阶）

除了组织趋向性，以下几点也至关重要：

1. 免疫原性：

   • 预存中和抗体： 很多人和动物体内已存在针对常见AAV血清型（如AAV2, AAV8, AAV9）的中和抗体。如果存在，病毒在注射前就会被清除，导致实验失败。

   • 解决方案：

     • 在注射前，检测实验动物（或患者）血清中的中和抗体滴度。

     • 选择预存抗体率较低的血清型，如 AAV5 或 AAVrh10。

     • 使用来自非人灵长类动物的稀有血清型（如AAVrh8, AAVrh10）。

2. 注射途径：

   • 同样的血清型，不同的注射方式会导致不同的感染模式。

   • 局部注射（如脑内立体定向注射、肌肉内注射）：病毒集中在局部，适合局部疾病模型。

   • 全身性注射（如尾静脉、腹腔注射）：病毒会分布到全身，适合全身性疾病。静脉注射时，AAV8和AAV9 对肝脏和心脏的靶向效率非常高。

3. 动物模型：

   • 不同物种对同一AAV血清型的反应可能不同。例如，AAV-PHP.B 对C57BL/6小鼠血脑屏障穿透性极强，但对其他品系小鼠或非人灵长类动物无效。

   • 务必查阅在您使用的特定动物模型上的文献。

4. 包装容量：

   • AAV的基因组包装上限约为4.7 kb。如果您的目的基因加上启动子、PolyA等调控元件超过此限制，需要考虑使用双载体系统或寻找更小的启动子。

5. 启动子选择：

   • 血清型决定了病毒能否进入细胞，而启动子决定了基因在哪些细胞中表达。选择组织特异性启动子（如肝脏特异性启动子TBG，神经元特异性启动子hSyn）可以进一步增强靶向特异性，减少脱靶效应。

三、总结

选择合适的AAV血清型是一个多因素决策过程：

• 首要因素： 目标组织/细胞类型。

• 关键验证： 查阅相关文献和在自身模型中进行预实验。

• 重要考量： 免疫原性、注射途径、动物物种和启动子。

没有“万能”的血清型，最佳选择永远是针对您的特定实验需求而定制的。