三质粒慢病毒包装,目的基因载体可以有多大

2025年11月20日
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三质粒慢病毒包装系统(3-plasmid system) 中,目的基因载体(transfer vector)的可装载大小通常为 8–9 kb(含所有元件)。超过这个范围,病毒包装效率会明显下降。

1.三质粒系统的慢病毒最大包装容量

内容 大小限制
慢病毒(HIV-1 伪型)理论最大容量 ~9.0–10 kb
推荐的安全包装大小(有效滴度) ≤ 8 kb
包含:启动子 + 目的基因 ORF + IRES/P2A(如有)+ 报告基因 + LTR + WPRE 等元件 全部计入

2.为什么超过 8–9 kb 会降低滴度?

  1. 基因组过大 ➜ 逆转录效率下降

  2. 包装颗粒装载能力有限 ➜ 颗粒数减少

  3. 大载体影响病毒 RNA 稳定性

  4. 滴度会呈指数级下降

3.目的基因 > 8 kb 怎么办?

可选方案:

  • 拆分包装(Dual-vector system)
    如:使用 Cre/LoxP、Intein、2A 分段重组系统

  • 换用 AAV(容量小,但可做双载体拼接)

  • 换用腺病毒(Ad5:可达 30 kb)

关于派真

作为一家专注于AAV 技术十余年,深耕基因治疗领域的CRO&CDMO,派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付,我们为全球客户提供一站式CMC解决方案,包括从早期概念验证、成药性评估到IITINDBLA的各个阶段。

 

凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台,我们能将AAV产量提高多至10倍,每批次产量可达1×10¹⁷vg,以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外,我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒(LNP)产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段,从研发到符合GMP的生产,提供端到端的一站式解决方案。

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