重组腺相关病毒(rAAV)包装是在体外生产用于基因治疗研究和应用的过程。HEK293细胞，由于其高转染效率和生产病毒能力，常用于rAAV的生产。以下是一个概述性的流程描述，解释在HEK293细胞中如何进行rAAV包装。
步骤1：质粒准备
需要三个主要质粒：一个含有目标基因和反向末端重复序列(ITRs)的转移质粒、一个编码AAV Rep和Cap基因的辅助质粒、以及一个含有病毒辅助功能，如Adenovirus辅助因子的助病毒质粒。
质粒DNA需要大量批量制备并且保证高纯度。
步骤2：细胞培养
HEK293细胞在适宜的培养基中培养，如DMEM，补充10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素。
维持细胞在最佳状态以确保高效的病毒包装。
细胞在传感前需要达到接近但不超过80%的密度。
步骤3：转染
使用常规转染方法，如钙磷共沉淀或脂质体介导的转染，将上述质粒混合物转染至HEK293细胞。
通常按照质粒构建设计和转染效率最优化转染条件，以便获得最大化的病毒产量。
步骤4：病毒收集与纯化
转染48小时后，收集细胞和培养上清中的病毒颗粒。
初步纯化步骤可能包括超速离心以浓缩病毒颗粒，后续步骤可能涉及梯度离心、离子交换色谱或亲和色谱等。
步骤5：滴度测定和辅助测试
纯化后的rAAV需要进行滴度测定，以确定病毒颗粒的数量，常用的方法包括qPCR或ELISA。
进行生物活性测试(如病毒转导效率)和其他质控测试(如病毒颗粒的纯度和完整性)。
步骤6：质量控制
最后，通过一系列质量控制检测来评估rAAV的生物活性和安全性，确认其适用于后续实验或临床研究。
这可能包括细胞毒性试验、内毒素水平和残留蛋白的监测。
包装rAAV的过程需要仔细控制和优化，以确保生产的病毒颗粒满足特定应用的需求。尽管这个概要提供了一个基本框架，具体的实验条件和工作流程可能需要依据实验室资源和具体的治疗目标进行调整。