CRISPR/Cas9合成简单、周期短、操作简单、效率高，是目前研究最多、应用最广泛的基因编辑工具。目前，通过全球基因编辑领域科学家的努力，在野生型CRISPR/Cas9基础上产生了许多突变体，这些突变体能成为更高效、更便捷的基因编辑工具和系统。

派真质粒库全部为自主设计改进的增强型质粒，为保护派真的知识产权，CRISPR系列不作为质粒形态出货，只在派真公司内作包装病毒用，同意这一条款是在派真订购克隆服务的前提条件。派真生物可为您提供多种CRISPR质粒定制及后续的AAV包装服务：

SpCas9/SpCas9HF（XA/XB）

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SpCas9是第—个被鉴定的CRISPR核酸酶，其PAM为NGG，PAM序列在基因中出现的频率，大约每8bp出现—次，基因长达4.2Kb。 派真生物以小于300 bp的EFS(EF1a短版本）启动子或miniCMV启动子(180 bp)驱动SpCas9, 使序列总长度不超过AAV的长度限制5Kb。

  特点 

• 使用经过优化的sgRNA scaffold，能提高切割效率约40%；
• SpCas9HF：SpCas9高保真度版本。K848A，K1003A, R1060A突变的SpCas9，据报道脱靶现象接近零，而切割活性与野生型相比无显著降低。

 

SpCas9定制sgRNA长度：19-20 nt

载体编号	启动子	基因	(Sp)sgRNA	搭配工作的载体或小鼠

SpCas9HF定制sgRNA长度：19-20 nt

载体编号	启动子	基因	(Sp)sgRNA	搭配工作的载体或小鼠

 

适用范围：

• XA01/XB01自身有SpCas9及sgRNA，能在任何基因型小鼠上单独工作。也可以搭配XA03B~XA27提供其它sgRNA及不同启动子驱动的Cre或跟踪蛋白;
• XA02/XB02/XA20/XB06单独提供EFS或miniCMV驱动的SpCas9表达盒；
• XA03B~XA27还能容纳800~2200nt的供体序列作为基因组修复的模板，AAV基因组是天然的单链DNA，作为提供基因组修复模板相比双链DNA的质粒能高出约50倍同源重组效率。

 

SaCas9/ SaCas9HF（AC/AD系列）

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SaCas9是活性与SpCas9相似的短版本Cas9，基因长度为3.2kb，因为有更严谨的PAM (NNGRRT)，PAM序列在基因中出现的频率，大约每32bp中出现一次，靶序列的长度为21nt-23nt，理论上脱靶率比SpCas9更低。

  特点 

• 使用了经优化的sgRNA scaffold, 显著提高切割效率；
• SaCas9/SaCas9HF及sgRNA，能在任何基因型小鼠上单独工作。也可以搭配AC043/AC044/AC045提供更多的sgRNA及Cre或跟踪蛋白;
• AC040/ AD040/ AC050~ AC120/ AD050~ AD120需要搭配AC041/ AC043/ AC044/AC045/ AC051~ AC121/；
• AD041 / AD051~ AD121提供 sgRNA;
• AC043/AC044/AC045表达sgRNA及Cre或跟踪蛋白;
• AC043/AC044/AC045还能容纳800~2200nt的供体序列作为基因组修复的模板。AAV基因组是天然的单链DNA，有数据表明，作为提供基因组修复模板相比双链DNA的质粒高出50倍修复效率。

 

SaCas9定制sgRNA长度：21-23 nt

载体编号	启动子	基因	(Sa)sgRNA	搭配工作的载体或小鼠

 

SaCas9HF定制sgRNA长度：21-23 nt

载体编号	启动子	基因	(Sa)sgRNA	搭配工作的载体或小鼠

 

AAV-CRISPR基因激活（XE系列）

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在14-16 nt的短RNA指导下，野生型SpCas9能结合到靶序列DNA上但不能切割与释放。此时，经过改造加入形成MS2 RNA接头的sgRNA骨架能结合MS2-P65-HSF1 转录激活成分，从而激活下游位置的基因转录。激活基因的转录水平能达1000倍以上。

 

定制sgRNA长度：14-l5nt

载体编号	启动子	基因	(Sp)sgRNA	搭配工作的载体或小鼠
XE01E	CMV	MS2-P65-HSF1	U6启动子，带MS2 RNA接头	XA01/XA02/XB01/XB02/SpCas9小鼠
XE02E	CMV	MS2-P65-HSF1-2A-Cre	U6启动子，带MS2 RNA接头	XA01/XA02/XB01/XB02/SpCas9X floxed目的基因小鼠

 

  特点 

• XE01E/XE02E可与XA01/XA02/XB01/XB02或SpCas9小鼠搭配使用;
• XE02E还表达Cre，也适合与SpCas9小鼠、目的基因Floxed的小鼠搭配使用。

 

其它CRISPR/Cas9质粒（XE系列）

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除了SpCas9/SpCas9HF(XA、XB系列）、SaCas9/ SaCas9HF (XC、XD系列）、AAV-CRISPR基因激活(XE系列），派真生物还可以为您提供NmCas9、AsCpfl,、LbCpfl质粒。

 

定制sgRNA长度：21-23nt

载体编号	启动子	基因	(Sp)sgRNA	搭配工作的载体或小鼠
XE01F	EFS	NmCas9	U6启动子	自身
XE02F	miniCMV	NmCas9	U6启动子	自身
XE01G	EFS	AsCpf1	U6启动子	自身
XE02G	miniCMV	NAsCpf1	U6启动子	自身
XE01H	EFS	LbCpf1	U6启动子	自身
XE02H	XE02H	LbCpf1	U6启动子	自身

 

  特点 

• NmCas9 是跟SpCas9有相似活性的短版本Cas9，基因长度为3.3kb，由于识别更长的PAM（NNNNGATT），PAM序列在基因中出现的频率，大约每128 bp中出现一次，靶序列长度为（21-23 nt)，理论脱靶率比SpCas9低得多；
• AsCpf1、LbCpf1拥有与 CRISPR-Cas9不一样的特性：更短小的sgRNA骨架；识别含T量高的5’PAM；靶标DNA被切于远离PAM的位置，且产生5个碱基突出的粘末端。

基因过表达（gene overexpression）是将目的基因CDS克隆到相应的质粒或病毒载体上，利用载体骨架上构建的调控元件，使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译，从而实现目的基因的过表达。

 

AAV-基因过表达（EA、EB、EC、ED系列）

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双链AAV（Double-stranded AAV, dsAAV,又称self-complementary AAV,scAAV) 在体内转导效率比单链AAV（sing-strand AAV,ssAAV)高6-10倍，所有载体均有EGFP表达载体，也可在C端、N端或任意位置加EGFP/mCherry/2A/Flag/HA/His/Snap等标签。

双链AAV scAAV

载体编号

启动子

特异性

单链AAV ssAAV

载体编号

启动子

特异性

客户提供所需的物种、基因名或基因序列，由派真生物进行设计载体图谱及载体构建。

 

LV-基因过表达（XL系列）

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派真生物XL系列可定制克隆您的目的基因，用于基因过表达实验。

载体编号

外源启动子

建议基因容量

启动子

筛选标签

 

  特点 

• 成熟高效表达载体，适用于多种实验设计；
• 可用GFP、mCherry、Puro、Neo等作为筛选标记。

RNA干扰（RNAi）是具有高度特异性的基因缺失研究工具。它存在于大多数真核生物中，已经广泛应用于各种真核生物的基因功能研究、药物发现和基因沉默治疗。

派真生物提供shRNA靶向基因和所需载体的文库编号。此外，我们还提供靶点设计、图谱制作和载体构建。如果目标靶点尚未经过验证，我们建议多选择2-3个候选靶点。

 

服务优势：

派真生物设计干扰位点实行3保1的政策。在目的细胞转染效率达到百分之九十(70%-90%）的前提下，针对编码基因，三个干扰序列里面保证—个在mRNA水平达到70％或以上。针对非编码基因，不承诺干扰效率。在此条件下，若三个干扰序列在mRNA水平都没有效果，您可以提供原始数据，派真再为您免费设计两个序列。

 

AAV-shRNA干扰（XM系列）

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近年来，多个试验表明，靶向致病基因的RNAi药物在治疗人类疾病方面具有巨大潜力。与其他方法相比，使用AAV载体表达shRNA来引起基因表达的下调可以长期调控活体动物的靶基因，这是活体动物基因研究的常用方法。H1，U6启动子常用于转录小的干扰RNA片段。研究人员认为，H1启动子的毒性较小，可使RNAi干扰实验的结果更为可靠。

载体编号	启动子	报告基因	shRNA 启动子
XM01	CAG（广谱）	EGFP	H1
XM13	CAG（广谱）	EGFP	U6
XM14	CAG（广谱）	mCherry	U6
XMlS	CAG（广谱）	EYFP	U6
XM16	CMV（广谱）	EGFP	U6
XM17	CMV（广谱）	mCherry	U6
XM18	CMV（广谱）	EYFP	U6

 

LV-shRNA干扰（XL系列）

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派真生物XL系列可定制克隆您的靶标序列shRNA，用于高效敲降培养细胞中的靶基因表达水平。可形成发夹结构的shRNA可在U6或H1启动子驱动下表达，并同时用CMV/EF1a等启动子驱动表达GFP绿色荧光蛋白作为跟踪蛋白。

载体编号	启动子	基因	标记／筛选基因
XL01B	U6启动子	CMV	copGFP
XL02B	Hl启动子	CMV	CopGFP-2A-Puro
XL03B	U6启动子	EF1a	EGFP-2A-Neo
XL04B	U6启动子	CMV	copGFP-2A-Puro
XL05B	U6启动子	CMV	Puro
XL06B	U6启动子	PGK	Puro.lRES.mCherry
XL07B	H1启动子	CMV	copGFP
XL08B	H1启动子	CMV	CopGFP-2A-Puro
XL09B	H1启动子	CMV	Puro
XL012B	U6启动子	CMV	Neo

 

  特点 

• EGFP、mCherry荧光蛋白作为跟踪蛋白；
• 灵活定制克隆，可表达多个shRNA。

miRNA是真核生物中的一种内源性小非编码RNA，其长度约为17-25bp。miRNA功能缺失的研究集中于筛选miRNA靶位点，筛选调节基因表达的miRNA，以及筛选影响生长和增殖的miRNA。

派真生物提供定制miRNA抑制的AAV载体，可直接用于抑制miRNA的功能并调节miRNA在活体动物中的表达。这是活体动物基因研究的常用方法。

类型	载体编号	启动子	报告基因
miRNA过表达	XM07	H1	maxGFP
miRNA抑制	XM03	U6	maxGFP
	XM04	U6	EGFP
	XM08	H1	EGFP

  特点 

• 直接、方便、高效的动物实验；
• 与传统合成抑制剂相比，作用时效更长、稳定性更高；
• 能够通过特定的AAV血清型靶向各种器官和组织；
• AAV-miRNA显现出更高的安全性和免疫原性。