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π-Alpha™ 293细胞AAV高产技术平台



派真生物专有的 π-Alpha™ 293 AAV 高产平台在三质粒转染系统中使用独特设计的 RC 质粒,可将各种血清型的 AAV 产量提高 3 至 8 倍。结合工艺生产过程中上游和下游 QbD 优化,总 AAV 产量可提高多达 10 倍。 单批AAV生产最多能提供1E+17vg病毒颗粒,可满足大多数临床级和商业级AAV生产的需求。

优势

  • 用独特设计的辅助RC质粒,提升293细胞体系AAV的产量可达10倍以上
  • 生产工艺极大提升悬浮细胞产量达10~25倍
  • 独特工艺极大减少关键杂质(HCD、内毒素等)
  • 关键技术降低空壳率、提升感染滴度

如您对我们的 AAV 服务感兴趣,请联系我们免费咨询 或者 提交需求与询价.

知识产权



  • 6项发明获得授权
  • 2项发明在申请

高产辅助质粒(293细胞/三质粒体系)通过在 Rep-Cap 质粒中添加非编码调控元件获得高产RC 质粒,将 AAV 产量提高 3-8 倍(已申请专利)。

通过关键工艺参数DOE实验优化,悬浮293生产体系总产率提高10倍以上

DOE 转染条件

细胞密度、质粒总量、质粒比例、转染试剂比例

DOE 工程参数 Ambr 反应器(赛多利斯)

搅拌速度 pH 溶氧 温度

DOE 裂解和收获条件

搅拌速度 密度 时间 温度

200L采用293细胞无血清悬浮工艺生产AAV产毒数据

总结



小批量的中试工艺开发策略成功地指导了使用无血清 293 悬浮细胞的 200L 放大 AAV 生产工艺。

200L 规模悬浮工艺实际生产AAV最高达7.3E+16 vg总裂解产量, >30% 回收率

透射电镜TEM

空壳率可低<5%,符合GMP的大规模生产

分析型超高速离心AUC

降低HCD的同时不影响AAV产率

通过对质粒进行独特的分子修饰,显著减少质粒 DNA 残基

独特分子改造质粒极大降低AAV病毒内质粒DNA残留(错包率),AAV产率无显著改变

具备可放大的超速离心去空壳工艺,可满足200~500L规模的批生产量

优势 描述
产量提高 RC质粒的设计使AAV产量提高3-8倍
CPP优化将AAV总产量提高10倍
更大规模优势 从125mL到200L(悬浮液)稳定的放大工艺
200L悬浮产量达7.3E+16vg(悬浮液)
更高安全性 HCD残留量为30~90ng/1E13 vg(悬浮液)
最佳全衣壳比率表现收获时(20~66%)和最终 (75~94%)
新型质粒设计方法减少了90%的包裹质粒杂志

π-Alpha™ 293 AAV高产技术平台