知识分享

在基因治疗和分子生物学研究领域，慢病毒载体因其独特的优势而被广泛应用。作为一种高效的基因递送工具，慢病毒能够将目的基因整合到分裂和非分裂细胞的基因组中，实现稳定的长期表达。然而，要确保实验的准确性和可重复性，测定慢病毒的滴度是至关重要的一步。 什么是慢病毒滴度？ 慢病毒滴度是指单位体积病毒悬液中具有感染能力的病毒颗粒数量，通常以转导单位(Transducing Units/mL，TU/mL)表示。 准确的滴度数据对于优化细胞感染效率，确保实验结果可重复性，避免细胞毒性，节约宝贵的病毒资源，满足临床研究的严格标准等尤为重要。...

腺相关病毒(AAV)载体因其安全性高、长期表达稳定、免疫原性低及可靠的组织靶向性等特点，已成为基因治疗的首选工具。然而，AAV载体最大的局限性是其有限的基因包装容量（约为4.7kb），这一限制使得AAV载体很难直接递送编码序列超过4kb的基因，因为完整的表达盒还需包含启动子、多聚腺苷酸信号(polyA)等调控元件 （图1）。   当需要递送编码序列超过4kb的基因时，拆分基因并使用双载体(Dual...

AAV-DJ是一种通过重组多种天然AAV血清型（如AAV2、AAV8、AAV9等）衣壳蛋白构建的人工血清型，具有广谱组织感染能力，但其倾向性在不同组织和实验条件下存在差异。以下是其主要的组织倾向性及相关特点的综合分析： 1. 主要靶向组织 (1) 肝脏 高效转导：AAV-DJ对肝脏表现出高亲和性，尤其在全身给药（如静脉注射）时，肝细胞转导效率显著，与AAV8相近。 应用场景：常用于肝脏相关基因治疗研究，如血友病或代谢性疾病模型，且在小鼠和高等灵长类动物中均有效。 (2) 中枢神经系统（CNS）...

CRISPR-Cas9 被誉为“基因魔剪”，但其编辑效率在不同场景下差异巨大。为何有些 Cas9 变体能高效编辑，而另一些却频频“失手”？ 近日，Molecular Cell 期刊发表了最新研究揭示了背后的核心机，这项由诺奖得主 Jennifer Doudna 教授（博士后史弘略为论文第一作者）领衔的研究，究揭示了广泛 PAM 识别与基因组编辑效率之间的基本权衡，提出了高效的 RNA 引导的基因组编辑依赖于优化的两步靶标捕获过程，其中选择性但低亲和力的 PAM 结合优先于快速的 DNA 解旋。这不仅解开了 CRISPR-Cas9...

可以的，慢病毒（Lentivirus）可以用来做敲低（knockdown）实验！ 一般来说，慢病毒系统可以用来稳定地转导shRNA（short hairpin RNA）或sgRNA（small guide RNA），从而实现基因敲低（RNA干扰）或基因敲除（CRISPR/Cas9系统）。 如果是敲低（knockdown），常见方法是： 慢病毒携带shRNA序列感染细胞 shRNA在细胞内表达后，形成siRNA，引导细胞内的RNA诱导沉默复合物（RISC） RISC结合到目标mRNA，导致其降解或抑制翻译，达到基因敲低效果...

有的，包装质粒（packaging plasmids）通常是带有抗性基因的。 具体来说，在慢病毒、逆转录病毒或腺相关病毒（AAV）系统中，包装质粒提供病毒结构蛋白（比如Gag、Pol、Rev、Env等），它们本身一般是用来在细胞里辅助生产病毒颗粒的。为了筛选、扩增这些质粒，大部分包装质粒会带有一种或多种抗生素抗性基因，比如： 氨苄青霉素抗性（Ampicillin resistance, Amp^R） 卡那霉素抗性（Kanamycin resistance, Kan^R） 青霉素/链霉素类抗性（Spectinomycin...

研究概述 2025年4月18日，意大利米兰圣拉斐尔电镜研究所基因治疗中心的Anna Kajaste-Rudnitski教授团队在Nature Communications期刊发表标题为“AAV vectors trigger DNA damage response-dependent pro-inflammatory signalling in human iPSC-derived CNS models and mouse...

腺相关病毒（AAV）是基因治疗中应用最广泛的病毒载体之一，因其高效性、安全性和低免疫原性而备受青睐。AAV能够感染细胞，其基因组以游离环状DNA的形式长期存在于细胞核内，整合到宿主基因组的频率极低，其衣壳蛋白序列决定了它们的组织特异性，不同血清型结合不同的细胞表面糖类和相关受体。但AAV的生物学特性仍有待深入研究，尤其是如何提高其组织靶向性和递送效率。 来自Baylor College of Medicine的William R. Lagor团队在2025年3月于Molecular Therapy上发表题为“A...

近日，基因治疗企业uniQure宣布，其针对亨廷顿舞蹈症（Huntington’s disease）的在研基因疗法AMT-130获美国食品药品监督管理局（FDA）授予突破性疗法认定。此前，该药物已获得再生医学先进疗法（RMAT）、孤儿药及快速通道等资格认定。此次获批突破性疗法认定这一进展标志着AMT-130在加速审批和临床开发路径上又迈出关键一步。  ...

腺相关病毒（AAV）作为基因治疗和基因功能研究的核心工具，因安全性高、免疫原性低等特点，被广泛用于基因递送和药物开发。在AAV的生产和应用过程中，滴度检测是确保载体质量和下游应用效果的关键环节。那么，AAV滴度应该如何检测？不同检测方法的原理、适用场景和各自的优劣势分别是什么？本文将为您全面解析。 一、AAV滴度的类型 AAV的滴度检测可分为物理滴度和功能滴度两大类。物理滴度主要反映病毒颗粒的数量，包括总颗粒数和基因组拷贝数；而功能滴度则反映具有感染能力的病毒颗粒数量。 基因组滴度（Genomic...