慢病毒包装服务慢病毒（Lentivirus）是一类逆转录病毒，由于其繁殖和感染细胞的过程需要更长时间，因此被称为“慢”病毒。此类病毒包括人免疫缺陷病毒（HIV）、猫免疫缺陷病毒（FIV）、猿免疫缺陷病毒（SIV）以及牛免疫缺陷病毒等。目前在科研与治疗中广泛使用的慢病毒载体，多是基于HIV-1基因组改造而成。
与常规的逆转录病毒载体相比，慢病毒载体对分裂状态和非分裂状态的细胞均具有感染能力，因此适用的宿主范围更广。此外，慢病毒载体能够将外源基因有效整合到宿主染色体中，实现持续且稳定的基因表达。在感染细胞类型方面，慢病毒载体可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞及干细胞等多种细胞类型，并且极少引发明显的免疫反应。
快速
1E+9 TU以内最快可在10个工作日交付
可靠
交付滴度≥1E+8 TU/mL，不担心滴度虚高，滴度最高可达1E+10 TU/mL
全面
提供从载体设计、病毒包装到分析检测的一站式服务
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及时响应式专业技术支持服务，定制病毒包装服务附赠等量对照病毒
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货物干冰低温运费均由派真生物承担
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专为细胞实验和动物实验设计的两种不同级别慢病毒包装
服务内容
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产品名称 |
交付内容 | 周期 |
| 细胞级慢病毒定制 | 1.病毒滴度≥1E+8 TU/mL； | 1E+10 TU以内8~12工作日 ＞1E+10 TU，咨询周期 |
| 2.等量对照病毒； | ||
| 3.实验报告电子版1份 | ||
| 动物级慢病毒定制 | 1.病毒滴度≥1E+8 TU/mL； | 1E+9 TU以内18~22工作日 ＞1E+9 TU，咨询周期 |
| 2.等量对照病毒； | ||
| 3.实验报告电子版1份 |
备注：
1、细胞级慢病毒包装推荐用于细胞实验；动物级慢病毒包装推荐用于动物实验。
2、对包装过程有不利影响的基因（例如毒性基因，破坏包装细胞完整性的基因，破坏慢病毒RNA基因组完整性的序列，易于重排或者产生二级结构的序列等）、核蛋白、跨膜蛋白、受体基因和LTR之间（不含LTR）片段≥6.5 kb的慢病毒定制包装不保证产量。
3、下单即送等量对照病毒。
1、多重酶切鉴定生产病毒所用质粒（常规质控）。
2、梯度稀释感染细胞，计数荧光细胞以测定病毒滴度（适用于表达荧光蛋白的定制慢病毒）。
3、感染细胞，定量qPCR测定慢病毒滴度（适用于不表达荧光蛋白的定制慢病毒）
慢病毒感染MOI计算
病毒液体积=细胞数 × MOI/病毒滴度
举例:滴度1.0E+8 TU/mL的慢病毒感染HEK293细胞所用培养基体积和病毒量；假如24孔板细胞接种量是5.0E+4； 6孔板细胞接种量为2.0+5个T25瓶细胞接种量是5.0+5个。
| 单孔底面积 | 正常培养体积 | 感染时体积 | MOI=10加病毒量 | MOI=100加病毒量 | |
| 24孔板 | 2 cm² | 500 μL | 250 μL | 5 μL | 50 μL |
| 6孔板 | 10 cm² | 2 mL | 1 mL | 20 μL | 200 μL |
| T25瓶 | 25 cm² | 5 mL | 2 mL | 50 μL | 500 μL |
慢病毒感染MOI预实验步骤
第一天：铺板，设置MOI梯度，可以按照MOI为2.5，5，10，20，40，80或者自行根据实际情况设置梯度。同时设置一个空白对照组，用来判定细胞状态。注：建议设置一组复孔，如下图所示：
| 空白组 | MOI=2.5 | MOI=5 | MOI=10 | MOI=20 | MOI=40 | MOI=80 |
| 空白组 | MOI=2.5 | MOI=5 | MOI=10 | MOI=20 | MOI=40 | MOI=80 |
细胞接种：一般24孔板每孔接种 3.0E~5.0E+4个细胞：如果细胞特别大可以适当减少，特别小可以适当增加；原则上建议第二天融合度约30~40%最佳。
感染：细胞接种后第二天加入慢病毒：按照设置的MOI算好每孔加的病毒量。慢病毒感染细胞可以加polybrene来增加感染效率，终浓度为5 μg/mL，轻轻摇匀后，放回培养箱继续培养；
换液：感染后8~20小时后，提前37°C预热培养基，弃去含有病毒的培养基，加入新鲜培养基，放回培养箱继续培养。
检测并确定合适的MOI值：在荧光显微镜下观察荧光表达情况或者通过qPCR检测目的基因的表达，来判断选择合适的MOI进行慢病毒感染实验。
慢病毒体外感染操作步骤
以24孔板为例，进行目的细胞感染预实验，按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据公式算出所需病毒量，如有必要可用无血清培养基稀释病毒原液。
常规质控
第一天，准备细胞：24孔板接种若干孔细胞，每孔接种约3.0E~5.0E+4个细胞，每孔培养基体积500 μL；进行病毒感染时，细胞融合度大约30~50%。
第二天，准备病毒并感染细胞：－80°C冰箱取出病毒先在冰上融化或者4°C融化，根据算好加入的病毒量稀释到培养基中，尽可能保证含有慢病毒的培养基为最小体积，以获得最佳感染效果。
更换培养基：一般感染8~20h后将含有病毒的培养液更换为新鲜培养基，感染后注意观察细胞状态，如果慢病毒感染对细胞有明显毒性而影响到细胞状态，则建议在加入病毒4~6h后，更换新鲜培养基。
感染效率检测：一般感染48~72h后，在倒置荧光显微镜下观究光，估计慢病毒感染目的细胞的效率：如果慢病毒没有带荧光标记则可通过qPCR检测目的基因的表达来评估感染效率。
注意：慢病毒表达时间较慢，荧光表达所需时间较长，建议感染后72h后再观察荧光表达以判断感染效率；感染期间请根据细胞生长状态，对细胞进行及时换液以保证良好的生长状态。
悬浮感染
接种适量胰酶消化后(或悬浮状态细胞，以在第二天密度约40%为宜。按计算所需要病毒体积，加入相应体积的培养基中，混匀。
更换培养基：加入病毒感染16小时后换液（若病毒对细胞状态影响不大，可48小时后再换液）。
感染效率检测：一般感染48~96小时后观察荧光，或者根据病毒裁体设计加入相应药物筛选。
常见细胞感染MOI
| 细胞名 | 细胞中文名 | 慢病毒感染（MOI） |
| 5637 | 人膀胱癌细胞 | 10 |
| 293T | 人胚肾上皮细胞 | 5 |
| A172 | 人胶质母细胞瘤细胞 | 10 |
| A549 | 人非小细胞肺癌细胞 | 10 |
| BEL-7402 | 人肝癌细胞 | 10 |
| BGC-823 | 人胃癌细胞 | 50 |
| Ca Ski | 人宫颈癌肠转移细胞 | 10 |
| Caki-1 | 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞 | 10 |
| CAL 27 | 人舌鳞癌细胞 | 20 |
| DU 145 | 人前列腺癌细胞 | 20 |
| F98 | 大鼠脑胶质瘤细胞 | 20 |
| GES-1 | 人胃上皮细胞 | 20 |
| H1299 | 人非小细胞肺癌细胞 | 10 |
| HCT 116 | 人结肠癌细胞 | 10 |
| Hela | 人宫颈癌细胞 | 10 |
| Hep 3B | 人肝癌细胞 | 10 |
| HepG2 | 人肝癌细胞 | 10 |
| HL-60 | 人原髓细胞白血病细胞 | 10 |
| HT-29 | 人结肠癌细胞 | 10 |
| K-562 | 人慢性髓原白血病细胞 | 10 |
| LoVo | 人结肠癌细胞 | 50 |
| MADB-106 | 大鼠乳腺癌细胞 | 20 |
| MCF-7 | 人乳腺癌细胞 | 20 |
| MDA-MB-231 | 人乳腺癌细胞 | 10 |
| MGC80-3 | 人胃癌细胞 | 10 |
| MHCC-97H | 人肝癌细胞（高转移） | 10~20 |
| NCI-H1299 | 人非小细胞肺癌细胞 | 20 |
| PC14 | 人肺癌细胞 | 10 |
| PC9 | 人肺癌细胞 | 5 |
| RKO | 人结肠腺癌细胞 | 10 |
| RWPE-1 | 人正常前列腺上皮细胞 | 20 |
| SH-SY5Y | 人神经上皮瘤细胞 | 20 |
| U-118 MG | 人脑星形胶质母细胞瘤 | 10 |
| U251 | 人胶质瘤细胞 | 5 |
| U266 | 人骨髓瘤细胞 | 20 |
| U-87 | 人脑星形胶质母细胞瘤细胞 | 5 |
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LV-基因过表达（XL系列）
| 载体编号 | 外源启动子 | 建议基因容量 | 启动子 | 筛选标签 |
| XL01C | CMV | 5 Kbp | 无 | 无 |
| XL02C | CMV | 4 Kbp | PGK | Puro |
| XL03C | CMV | 3.3 Kbp | EF1 | CopGFP-2A-Puro |
| XL04C | CMV | 4 Kbp | EF1 | mCherry |
| XL05C | CMV | 4 Kbp | IRES | Neo |
| XL06C | CMV | 4 Kbp | EF1 | copGFP |
| XL07C | CMV | 4.3 Kbp | 无 | 2A-Neo |
| XL08C | EF1 | 3.3 Kbp | CMV | CopGFP-T2A-Puro |
| XL09C | EF1 | 3.2 Kbp | CMV | C-3×Flag、CopGFP-T2A-Puro |
| XL10C | CMV | 4 Kbp | EF1 | mRuby2 |
| XL11C | CMV | 4 Kbp | EF1 | mCitrine |
| XL12C | CMV | 4 Kbp | EF1 | EYFP |
| XL13C | CMV | 4 Kbp | EF1 | Neo，CopGFP |
| XL14C | CMV | 3.3 Kbp | EF1 | EGFP-2A-Neo |
| XL15C | CMV | 2.7 Kbp | EF1 | C-3×Flag、CopGFP-T2A-Puro |
| XL16C | EF1 | 3.2 Kbp | CMV | N-3×Flag、CopGFP-T2A-Puro |
| XL17C | EF1 | 3.9 Kbp | CMV | C-3×Flag、CopGFP |
| XL18C | CMV | / | C-3×Flag、Puro | |
| XL19C | CMV | / | dTomato-T2A-Puro | |
| XL20C | CMV | / | CopGFP | |
| XL21C | CMV | / | CopGFP-T2A-Puro | |
| XL22C | CMV | EF1 | mCherry-2A-Neo |
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特点：
- 成熟高效表达载体，适用于多种实验设计；
- 可用GFP、mCherry、Puro、Neo等作为筛选标记。
LV-shRNA干扰（XL系列）
派真生物XL系列可定制克隆您的靶标序列shRNA，用于高效敲降培养细胞中的靶基因表达水平。可形成发夹结构的shRNA可在U6或H1启动子驱动下表达，并同时用CMV/EFla等启动子驱动表达GFP绿色荧光蛋白作为跟踪蛋白。
| 载体编号 | shRNA启动子 | 报告基因启动子 | 标记／筛选基因 |
| XL01B | U6启动子 | CMV | copGFP |
| XL02B | Hl启动子 | CMV | CopGFP-2A-Puro |
| XL03B | U6启动子 | EF1a | EGFP-2A-Neo |
| XL04B | U6启动子 | CMV | copGFP-2A-Puro |
| XL05B | U6启动子 | CMV | Puro |
| XL06B | U6启动子 | PGK | Puro.lRES.mCherry |
| XL07B | H1启动子 | CMV | copGFP |
| XL08B | H1启动子 | CMV | CopGFP-2A-Puro |
| XL09B | H1启动子 | CMV | Puro |
| XL012B | U6启动子 | CMV | Neo |
派真生物提供定制miRNA抑制的AAV载体，可直接用于抑制miRNA的功能并调节miRNA在活体动物中的表达。这是活体动物基因研究的常用方法。
| 类型 | 载体编号 | 启动子 | 报告基因 |
| miRNA过表达 | XM07 | H1 | maxGFP |
| miRNA抑制 | XM03 | U6 | maxGFP |
| XM04 | U6 | EGFP | |
| XM08 | H1 | EGFP |
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