质粒构建与克隆
如果需要加标签或特定序列，请提供最终设计图谱电子版本(.gb或.dna格式）或与派真生物沟通，派真生物在此基础上再设计克隆方案。
| 细胞系 | 克隆服务描述 | 客户提供 | 提供给客户 | ||||||||
| KL001 | 常规克隆shRNA、sgRNA、miRNA、miRNATUD |
靶基因序列信息
|
EA/EB/EC/ED/XM//XL系列：
A/B/C/D/E/F/G/H/XL系列：
|
||||||||
| KL002 | 插入序列2000 bp以下的基因序列 | ||||||||||
| KL003 | 插入序列2000 bp-3000 bp的基因序列 | ||||||||||
| KL004 | 插入序列3000 bp-4000 bp的基因序列 | ||||||||||
| KL005 | 插入序列4000 bp-5000 bp的基因序列 | ||||||||||
服务流程：
SpCas9/SpCas9HF（XA/XB）
SpCas9是第—个被鉴定的CRISPR核酸酶，其PAM为NGG，PAM序列在基因中出现的频率，大约每8 bp出现—次，基因长达4.2 Kb。 派真生物以小于300 bp的EFS（EF1a短版本）启动子或miniCMV启动子（180 bp）驱动SpCas9, 使序列总长度不超过AAV的长度限制5 Kb。
特点：
使用经过优化的sgRNA scaffold，能提高切割效率约40%；
SpCas9HF：SpCas9高保真度版本。K848A，K1003A, R1060A突变的SpCas9，据报道脱靶现象接近零，而切割活性与野生型相比无显著降低。
SpCas9定制sgRNA长度：19-20 nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sp)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| 广谱启动子驱动SpCas9+ sgRNA表达盒 | ||||
| XA01 | EFS（广谱） | SpCas9 | H1启动子 | 自身／XA03B~ XA27 |
| XA19 | miniCMV | SpCas9 | H1启动子 | 自身／XA03B~ XA27 |
| 广谱启动子驱动SaCas9无sgRNA表达盒 | ||||
| XA02 | EFS | SpCas9 | / | XA03B~ XA27 |
| XA20 | miniCMV | SpCas9 | / | XA03B~ XA27 |
| U6-sgRNA表达盒无SaCas9 | ||||
| XA03B | EFS | mCherry | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA04 | EFS | Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA05 | EFS | mCherry-2A-Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA06 | EFS | Renilaluciferase-2A-Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA07 | EFS | ZsGreen | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA08 | / | / | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA09 | CAG | EGFP-KASH | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA13 | EF1 | mCherry | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA14 | EF1 | Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA15 | EF1 | mCherry-2A-Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA16 | EF1 | Renilaluc-2A-Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA17 | EF1 | ZsGreen | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA27 | CAG | EGFP | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
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| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sp)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| 广谱启动子驱动SpCas9+ sgRNA表达盒 | ||||
| XB01 | EFS | SpCas9HF | H1启动子 | 自身／XA03/XA04/XA05/XA06 |
| XB03 | EFS | eSpCas91.1 | H1启动子 | |
| XB05 | miniCMV | SpCas9HF | H1启动子 | |
| XB07 | miniCMV | eSpCas91.1 | H1启动子 | |
| 广谱启动子驱动SaCas9无sgRNA表达盒 | ||||
| XB02 | EFS | SpCas9HF | / | XA03/XA04/XA05/XA06 |
| XB04 | EFS | eSpCas91.1 | / | |
| XB06 | miniCMV | SpCas9HF | / | |
| XB08 | miniCMV | eSpCas91.1 | / | |
| XB09 | EFS | Xcas9 | / | |
| XB10 | miniCMV | Xcas9 | / | |
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适用范围：
XA01/XB01自身有SpCas9及sgRNA，能在任何基因型小鼠上单独工作。也可以搭配XA03B~XA27提供其它sgRNA及不同启动子驱动的Cre或跟踪蛋白；
XA02/XB02/XA20/XB06单独提供EFS或miniCMV驱动的SpCas9表达盒；
XA03B~XA27还能容纳800~2200 nt的供体序列作为基因组修复的模板，AAV基因组是天然的单链DNA，作为提供基因组修复模板相比双链DNA的质粒能高出约50倍同源重组效率。
SaCas9/ SaCas9HF（AC/AD系列）
SaCas9是活性与SpCas9相似的短版本Cas9，基因长度为3.2 kb，因为有更严谨的PAM (NNGRRT)，PAM序列在基因中出现的频率，大约每32 bp中出现一次，靶序列的长度为21 nt~23 nt，理论上脱靶率比SpCas9更低。
特点：
使用了经优化的sgRNA scaffold，显著提高切割效率；
AD041 / AD051~ AD121提供 sgRNA；
AC043/AC044/AC045表达sgRNA及Cre或跟踪蛋白；
SaCas9/SaCas9HF及sgRNA，能在任何基因型小鼠上单独工作。也可以搭配AC043/AC044/AC045提供更多的sgRNA及Cre或跟踪蛋白；
AC040/ AD040/ AC050~ AC120/ AD050~ AD120需要搭配AC041/ AC043/ AC044/AC045/ AC051~ AC121/；
AC043/AC044/AC045还能容纳800~2200 nt的供体序列作为基因组修复的模板。AAV基因组是天然的单链DNA，有数据表明，作为提供基因组修复模板相比双链DNA的质粒高出50倍修复效率。
SaCas9定制sgRNA长度：21-23 nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sa)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| CMV启动子驱动SaCas9+ U6-sgRNA表达盒 | ||||
| AC041 | CMV | SaCas9 | U6启动子 | 自身／AC043/AC044/AC045或其它 AC043/AC044/AC045或其它 |
| AC043 | CMV | mCherry | U6启动子 | AC041/AC040/AD041/AD040/ClXX/C2XX |
| AC044 | CMV | Cre | U6启动子 | AC041/AC040/AD041/AD040/目的基因floxed小鼠 |
| AC045 | CMV | mCherry-2A-Cre | U6启动子 | AC041/AC040/AD041/AD040/目的基因floxed小鼠 |
| CMV启动子驱动SaCas9无sgRNA表达盒 | ||||
| AC040 | CMV | SaCas9 | / | AC043/AC044/AC045或其它 |
| 特异性启动子驱动SaCas9 + U6-sgRNA表达盒 | ||||
| AC051 | TBG | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC011 | EFS | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC061 | Elastase I | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC071 | rlnsulin 2 | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC081 | mlnsulin2 | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC091 | hDesmin | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC101 | hSynapsin | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD121 | hMECP2 | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC061 | Elastase I | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| 特异性启动子驱动SaCas9无sgRNA表达盒 | ||||
| AC050 | TBG | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC010 | EFS | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC060 | Elastase I | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC070 | rlnsulin 2 | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC080 | mlnsulin2 | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC090 | hDesmin | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC100 | hSyn | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC120 | hMECP2 | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC190 | CBh | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
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SaCas9HF定制sgRNA长度：21-23 nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sa)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| CMV启动子驱动SaCas9HF+ U6-sgRNA表达盒 | ||||
| AD041 | CMV | SaCas9HF | U6启动子 | 自身／AC043/AC044/AC045或其它 |
| CMV启动子驱动SaCas9HF无sgRNA表达盒 | ||||
| AD040 | CMV | SaCas9HF | / | AC043/AC044/AC045或其它 |
| 特异性启动子驱动SaCas9HF+ U6-sgRNA表达盒 | ||||
| AD051 | TBG | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD011 | EFS | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD061 | Elastase I | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD071 | rlnsulin 2 | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD081 | mlnsulin2 | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD091 | hDesmin | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD101 | hSyn | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD121 | hMECP2 | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| 特异性启动子驱动SaCas9HF无sgRNA表达盒 | ||||
| AD050 | TBG | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD010 | EFS | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD060 | Elastase I | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD070 | rlnsulin 2 | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD080 | mlnsulin2 | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD090 | hDesmin | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD100 | hSyn | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD120 | hMECP2 | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
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AAV-CRISPR基因激活（XE系列）
在14-16 nt的短RNA指导下，野生型SpCas9能结合到靶序列DNA上但不能切割与释放。此时，经过改造加入形成MS2 RNA接头的sgRNA骨架能结合MS2-P65-HSF1 转录激活成分，从而激活下游位置的基因转录。激活基因的转录水平能达1000倍以上。
特点
- XE01E/XE02E可与XA01/XA02/XB01/XB02或SpCas9小鼠搭配使用;
- XE02E还表达Cre，也适合与SpCas9小鼠、目的基因Floxed的小鼠搭配使用。
定制sgRNA长度：14-15 nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sp)sgRNA |
搭配工作的载体或小鼠 |
| XE01E | CMV | MS2-P65-HSF1 | U6启动子，带MS2 RNA接头 |
XA01/XA02/XB01/XB02/SpCas9小鼠 |
| XE02E | CMV | MS2-P65-HSF1-2A-Cre | U6启动子，带MS2 RNA接头 |
XA01/XA02/XB01/XB02/SpCas9X floxed目的基因小鼠 |
其它CRISPR/Cas9质粒（XE系列）
除了SpCas9/SpCas9HF(XA、XB系列）、SaCas9/ SaCas9HF (XC、XD系列）、AAV-CRISPR基因激活（XE系列），派真生物还可以为您提供NmCas9、AsCpfl,、LbCpfl质粒。
定制sgRNA长度：21-23 nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sp)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| XE01F | EFS | NmCas9 | U6启动子 | 自身 |
| XE02F | miniCMV | NmCas9 | U6启动子 | 自身 |
| XE01G | EFS | AsCpf1 | U6启动子 | 自身 |
| XE02G | miniCMV | NAsCpf1 | U6启动子 | 自身 |
| XE01H | EFS | LbCpf1 | U6启动子 | 自身 |
| XE02H | XE02H | LbCpf1 | U6启动子 | 自身 |
特点
- NmCas9 是跟SpCas9有相似活性的短版本Cas9，基因长度为3.3 kb，由于识别更长的PAM（NNNNGATT），PAM序列在基因中出现的频率，大约每128 bp中出现一次，靶序列长度为（21-23 nt)，理论脱靶率比SpCas9低得多；
- AsCpf1、LbCpf1拥有与 CRISPR-Cas9不一样的特性：更短小的sgRNA骨架；识别含T量高的5’PAM；靶标DNA被切于远离PAM的位置，且产生5个碱基突出的粘末端。
AAV-基因过表达（EA、EB、EC、ED系列）
双链AAV（Double-stranded AAV，dsAAV，又称self-complementary AAV，scAAV) 在体内转导效率比单链AAV（sing-strand AAV，ssAAV)高6~10倍，所有载体均有EGFP表达载体，也可在C端、N端或任意位置加EGFP/mCherry/2A/Flag/HA/His/Snap等标签。
双链AAV scAAV
| 载体编号 | 启动子 | 特异性 |
| EC011 | EFS | 广谱 |
| ED011 | ||
| EC021 | CAG | 广谱 |
| ED021 | ||
| EC031 | EF1a | 广谱 |
| ED031 | ||
| EC041 | CMV | 广谱 |
| ED041 | ||
| EC051 | TBG | 肝 |
| ED051 | ||
| EC061 | Elastase-1 | 胰腺，acinar细胞 |
| ED061 | ||
| EC071 | 大鼠lnsulin2 | 胰腺，beta细胞 |
| ED071 | ||
| EC081 | 小鼠lnsulin2 | 胰腺，beta细胞 |
| ED081 | ||
| EC091 | hDesmin | 骨骼肌，心肌 |
| ED091 | ||
| EC0101 | hSyn | 神经元neuron |
| ED0101 | ||
| ED0111 | hGFAP | 神经系统，星形胶质细胞astrocytes |
| EC0121 | hMeCP2 | 神经元neuron |
| ED0121 | ||
| EC0131 | CaMKlla | 新皮质和海马体中的兴奋性神经元 |
| ED0131 | ||
| ED0141 | 小鼠TRP-2 | 色素细胞 |
| EC0151 | mGAD1 | GABA能神经元 |
| ED0151 | ||
| EC0161 | rMCPT5 | 肥大细胞 |
| ED0161 | ||
| EC0171 | hGFAP848 | 神经系统，星形胶质细胞astrocytes |
| ED0171 | ||
| EC0181 | cTNT | 心肌细胞 |
| ED0181 | ||
| EC0191 | CBh | 广谱 |
| ED0191 | ||
| EC201 | EF1 | 广谱 |
| ED201 | ||
| EC211 | CaMKlla370 | 新皮质和海马体中的兴奋性神经元 |
| ED211 | ||
| EC241 | CAGW | 广谱 |
| ED241 | ||
| EC251 | TH | 神经系统，多巴胺能神经细胞 |
| ED251 | ||
| EC411 | miniCMV | 广谱 |
| ED411 |
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单链AAV ssAAV
| 载体编号 | 启动子 | 特异性 |
| EA011 | EFS | 广谱 |
| EB011 | ||
| EA021 | CAG | 广谱 |
| EB021 | ||
| EA031 | EF1a | 广谱 |
| EB031 | ||
| EA041 | CMV | 广谱 |
| EB041 | ||
| EA051 | TBG | 肝 |
| EB051 | ||
| EA061 | Elastase-1 | 胰腺，acinar细胞 |
| EB061 | ||
| EA071 | 大鼠lnsulin2 | 胰腺，beta细胞 |
| EB071 | ||
| EA081 | 小鼠lnsulin2 | 胰腺，beta细胞 |
| EB081 | ||
| EA091 | hDesmin | 骨骼肌，心肌 |
| EB091 | ||
| EA0101 | hSyn | 神经元neuron |
| EB0101 | ||
| EA0111 | hGFAP | 神经系统，星形胶质细胞astrocytes |
| EB0111 | ||
| EA0121 | hMeCP2 | 神经元neuron |
| EB0121 | ||
| EA0131 | CaMKlla | 新皮质和海马体中的兴奋性神经元 |
| EB0131 | ||
| EA0141 | 小鼠TRP-2 | 色素细胞 |
| EB0141 | ||
| EA0151 | mGAD1 | GABA能神经元 |
| EB0151 | ||
| EA0161 | rMCPT5 | 肥大细胞 |
| EB0161 | ||
| EA0171 | hGFAP848 | 神经系统，星形胶质细胞astrocytes |
| EB0171 | ||
| EA0181 | cTNT | 心肌细胞 |
| EB0181 | ||
| EA0191 | CBh | 广谱 |
| EB0191 | ||
| EA201 | EF1 | 广谱 |
| EB201 | ||
| EA211 | CaMKlla370 | 新皮质和海马体中的兴奋性神经元 |
| EB211 | ||
| EA241 | CAGW | 广谱 |
| EB241 | ||
| EA251 | TH | 神经系统，多巴胺能神经细胞 |
| EB251 | ||
| EA411 | miniCMV | 广谱 |
| EB411 |
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客户提供所需的物种、基因名或基因序列，由派真生物进行设计载体图谱及载体构建。
LV-基因过表达（XL系列）
派真生物XL系列可定制克隆您的目的基因，用于基因过表达实验。
特点
- 成熟高效表达载体，适用于多种实验设计；
- 可用GFP、mCherry、Puro、Neo等作为筛选标记。
| 载体编号 | 外源启动子 | 建议基因容量 | 启动子 | 筛选标签 |
| XL01C | CMV | 5 Kbp | 无 | 无 |
| XL02C | CMV | 4 Kbp | PGK | Puro |
| XL03C | CMV | 3.3 Kbp | EF1 | CopGFP-2A-Puro |
| XL04C | CMV | 4 Kbp | EF1 | mCherry |
| XL05C | CMV | 4 Kbp | IRES | Neo |
| XL06C | CMV | 4 Kbp | EF1 | copGFP |
| XL07C | CMV | 4.3 Kbp | 无 | 2A-Neo |
| XL08C | EF1 | 3.3 Kbp | CMV | CopGFP-T2A-Puro |
| XL09C | EF1 | 3.2 Kbp | CMV | C-3×Flag、CopGFP-T2A-Puro |
| XL10C | CMV | 4 Kbp | EF1 | mRuby2 |
| XL11C | CMV | 4 Kbp | EF1 | mCitrine |
| XL12C | CMV | 4 Kbp | EF1 | EYFP |
| XL13C | CMV | 4 Kbp | EF1 | Neo,CopGFP |
| XL14C | CMV | 3.3 Kbp | EF1 | EGFP-2A-Neo |
| XL15C | CMV | 2.7 Kbp | EF1 | C-3×Flag、CopGFP-T2A-Puro |
| XL16C | EF1 | 3.2 Kbp | CMV | N-3×Flag、CopGFP-T2A-Puro |
| XL17C | EF1 | 3.9 Kbp | CMV | C-3×Flag、CopGFP |
| XL18C | CMV | / | C-3xFlag、Puro | |
| XL19C | CMV | / | dTomato-T2A-Puro | |
| XL20C | CMV | / | CopGFP | |
| XL21C | CMV | / | CopGFP-T2A-Puro | |
| XL22C | CMV | EF1 | mCherry-2A-Neo |
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服务优势：
派真生物设计干扰位点实行3保1的政策。在目的细胞转染效率达到百分之九十（70%~90%）的前提下，针对编码基因，三个干扰序列里面保证—个在mRNA水平达到70％或以上。针对非编码基因，不承诺干扰效率。在此条件下，若三个干扰序列在mRNA水平都没有效果，您可以提供原始数据，派真再为您免费设计两个序列。
| 载体编号 | 启动子 | 报告基因 | shRNA 启动子 |
| XM01 | CAG（广谱） | EGFP | H1 |
| XM13 | CAG（广谱） | EGFP | U6 |
| XM14 | CAG（广谱） | mCherry | U6 |
| XMlS | CAG（广谱） | EYFP | U6 |
| XM16 | CMV（广谱） | EGFP | U6 |
| XM17 | CMV（广谱） | mCherry | U6 |
| XM18 | CMV（广谱） | EYFP | U6 |
LV-shRNA干扰（XL系列）
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | 标记／筛选基因 |
| XL01B | U6启动子 | CMV | copGFP |
| XL02B | Hl启动子 | CMV | CopGFP-2A-Puro |
| XL03B | U6启动子 | EF1a | EGFP-2A-Neo |
| XL04B | U6启动子 | CMV | copGFP-2A-Puro |
| XL05B | U6启动子 | CMV | Puro |
| XL06B | U6启动子 | PGK | Puro.lRES.mCherry |
| XL07B | H1启动子 | CMV | copGFP |
| XL08B | H1启动子 | CMV | CopGFP-2A-Puro |
| XL09B | H1启动子 | CMV | Puro |
| XL012B | U6启动子 | CMV | Neo |
特点
- 直接、方便、高效的动物实验；
- 与传统合成抑制剂相比，作用时效更长、稳定性更高；
- 能够通过特定的AAV血清型靶向各种器官和组织；
- AAV-miRNA显现出更高的安全性和免疫原性。
|
类型 |
载体编号 | 启动子 | 报告基因 |
| miRNA过表达 | XM07 | H1 | maxGFP |
| miRNA抑制 | XM03 | U6 | maxGFP |
| XM04 | U6 | EGFP | |
| XM08 | H1 | EGFP |
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