腺相关病毒（AAV，Adeno-Associated Virus）是一种常用于基因治疗的病毒载体，能有效携带目的基因用于基因治疗、基础研究或疫苗开发等领域，其包装流程通常分为以下几个步骤：
1. 质粒准备
包装AAV载体需要三种质粒：
- 转移质粒（Transfer Plasmid）：含有目的基因以及AAV的倒置末端重复序列（ITR）。ITR序列是AAV的关键结构，决定病毒基因组的包装。
- 辅助质粒（Helper Plasmid）：提供AAV包装所需的病毒辅助因子，如腺病毒的E2A、E4、VA基因，这些因子是帮助病毒复制和装配的。
- 包装质粒（Rep/Cap Plasmid）：编码AAV的包装蛋白，包括Rep（复制）和Cap（衣壳）蛋白，用于AAV的复制和形成病毒衣壳。不同的Cap基因决定了AAV的血清型。
2. 细胞转染
- 选择合适的宿主细胞系（如HEK293细胞），这些细胞对AAV的包装效率高。
- 使用化学试剂或电穿孔法将上述三种质粒同时转染入细胞。转染后，细胞开始合成目的基因的mRNA以及AAV的包装蛋白。
3. 病毒复制和包装
- 转染成功后，细胞内开始复制目的基因的DNA，并在Rep/Cap蛋白的帮助下将这些DNA包装进新形成的AAV衣壳中。
- 辅助质粒中的腺病毒辅助因子确保AAV能够有效复制。
4. 病毒收集
- 转染完成后，经过48-72小时的培养，细胞内会积累大量的AAV颗粒。
- 通过裂解细胞（如超声波裂解或冻融法），释放出细胞内的AAV病毒。
5. 病毒纯化
- 为了获得高纯度的AAV颗粒，通常需要进行纯化。常用的纯化方法包括：
- 氯化铯密度梯度离心法：根据AAV的密度分离病毒颗粒。
- 层析法：如离子交换层析、亲和层析等，进一步纯化AAV。
6. 病毒浓缩
- 将纯化后的病毒通过超滤或沉淀等方法浓缩，以提高病毒滴度。
7. 病毒定量
- 使用实时PCR（qPCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）或荧光标记等方法，测定病毒颗粒的浓度。
8. 病毒储存
- 最终，包装好的AAV病毒可存放在低温条件下（通常是-80°C），以维持病毒的活性并便于后续实验或治疗使用。