1、用于一般动物实验的AAV量应该是多少？
使用的量取决于目标组织和给药方法，但对于小鼠来说，用量将在10^11到10^12 vg/动物之间（vg = 载体基因组，通过实时定量PCR测量）。然而，确切的剂量应该通过实验确定。
2、AAV病毒载体表达目的基因效果差
| 可能的原因 | 解决方案 |
| AAV血清型靶向特异性不足 | 测试不同的AAV血清型对靶标组织/细胞的特异性； |
| 通过基因工程修饰AAV的衣壳蛋白，改进AAV的靶向性 | |
| 病毒量不够 | 做预实验进行最佳感染剂量探索，确保使用适量的病毒 |
| 启动子选择不当，目的基因表达量低 | 优化启动子选择，根据目标细胞类型选择合适的启动子 |
| mRNA翻译效率低 | 增加IRES或其他元件来增强翻译效率 |
| 调整目的基因的序列以优化其mRNA结构，增加翻译效率 |
3、AAV（带荧光标记）体内感染后检测不到荧光，或者荧光弱
| 可能的原因 | 解决方案 |
| 病毒滴度过低 | 重新测定病毒滴度 |
| 病毒失效。病毒颗粒在生产、保存或运输过程中可能受损，导致感染效率低或完全失效 | 检查病毒滴度 |
| 体外测试病毒的感染效果 | |
| 重新包装病毒 | |
| 对目标组织/细胞的感染效率低 | 选择组织/细胞特异性AAV血清型 |
| 荧光蛋白表达的问题 | 使用合适的启动子以确保荧光蛋白在目标细胞中有效表达。 |
| 启动子选择不当：如果用于驱动荧光蛋白表达的启动子在目标组织中不活跃或不合适，可能导致荧光蛋白表达不足或不表达。 | 增加感染时间，确保荧光蛋白有足够时间表达。 |
| 表达时间不足：荧光蛋白的表达可能需要一定的时间。如果感染时间不够长，荧光蛋白可能尚未充分表达，导致观察不到荧光。 | |
| 荧光检测的问题 | 优化荧光检测方法，使用高灵敏度的荧光显微镜或其他检测设备。 |
| 检测方法不敏感：如果荧光蛋白表达量较低，可能需要敏感的设备或技术来检测。如果检测设备灵敏度不足，可能导致检测不到荧光。 | |
| 组织自发荧光：一些组织本身可能具有自发荧光，干扰了荧光蛋白的检测，使得实际的荧光信号被掩盖。 | |
| 荧光蛋白的降解或失活 | 尝试使用稳定性更高或pH不敏感的荧光蛋白。 |
| 荧光蛋白降解：荧光蛋白可能在表达后被快速降解，特别是在特定组织中具有高降解酶活性的情况下，导致观察不到荧光信号。 | |
| pH环境影响荧光：一些荧光蛋白对pH值敏感，在酸性环境下（如溶酶体）可能会失去荧光。 |
4、注射AAV后，实验动物死亡
对于体内研究（动物实验），使⽤超纯化的、低内毒素、⽆杂质（⽆活性的病毒颗粒、细胞碎⽚和培养液成分）的腺相关病毒在避免引发强免疫反应⽅⾯⾄关重要，尤其是在注射剂量较高时。纯度不够的AAV容易引起动物死亡。