AAV辅助质粒（AAV helper plasmid）是用于腺相关病毒（AAV）生产和包装的重要工具，其主要作用是提供AAV复制和包装所需的辅助因子。这些因子通常由腺病毒（Adenovirus）天然提供，但通过使用AAV辅助质粒，可以在无腺病毒的情况下实现AAV载体的生产，降低病毒污染的风险。
具体作用
1.提供腺病毒辅助基因： AAV本身无法独立复制，需要依赖腺病毒的辅助基因来完成其生命周期。辅助质粒通常携带关键的腺病毒基因，如 E2A、E4 和 VA RNA，这些基因能够激活AAV基因组的复制和包装。
2.辅助AAV病毒颗粒组装： AAV辅助质粒配合AAV载体质粒和包装质粒，能有效支持AAV病毒颗粒的生成。包装质粒提供AAV的衣壳蛋白，载体质粒携带目标基因，而辅助质粒提供腺病毒辅助功能。
3.避免腺病毒直接感染： 通过辅助质粒系统，可以避免引入活腺病毒感染，提升生产的安全性和可控性，同时减少非特异性免疫反应。
AAV生产三质粒系统
在常见的AAV三质粒包装系统中，通常使用以下三种质粒：
1.AAV载体质粒：包含目标基因以及AAV的反向末端重复序列（ITRs），用于包装目标基因。
2.包装质粒：编码AAV的衣壳蛋白（如Rep和Cap蛋白）。
3.辅助质粒：提供腺病毒辅助基因（E2A、E4和VA RNA）。
通过共同转染宿主细胞（如HEK293细胞），这三种质粒协同工作，可高效生产具有感染力的AAV颗粒。