在实验或生产中收集腺相关病毒(AAV)的最佳时间取决于所使用的生产系统(如 HEK293 细胞系统)以及病毒的产生速率和细胞状态。

1. 细胞收集时间

常见的生产系统:如三质粒共转染法(使用 HEK293 细胞),AAV病毒通常在转染后 48-72小时 达到较高的滴度。

注意事项

过早收集:可能会导致病毒滴度较低。

过晚收集:细胞开始死亡,释放过多的细胞碎片,增加下游纯化的难度。

实验中可以根据时间点(如 24h、48h、72h)收集样品,分析病毒滴度以确定最佳收集时间。

 

2. 病毒存在的位置

细胞内病毒:如果目标是收集细胞内的AAV病毒颗粒,建议使用 转染后48-72小时 的细胞进行裂解。

细胞外病毒:AAV病毒可能部分分泌到培养基中。若目标是收集培养上清,则也建议在 48-72小时 内收集。

 

3. 具体优化

滴度检测:通过 qPCR 或 ELISA 检测病毒基因组拷贝数或 capsid 数量,进一步优化收集时间。

细胞健康状况:通过显微镜观察,确保在细胞尚未大规模凋亡之前收集样品,以减少杂质。

可以根据实验需求调整收集策略,确保收集到高滴度的病毒颗粒!