AAV病毒包装质粒主要包括以下几种:
1.表达载体
基本结构:包含ITR序列、启动子、多克隆位点等。ITR序列是AAV基因组的两端各有一个的反向末端重复序列,负责引导病毒载体基因组复制和包装;启动子用于驱动外源基因的表达;多克隆位点则便于外源基因的插入。
功能:用于携带外源基因,将野生型AAV的Rep基因和Cap基因剔除后,用外源基因及表达调控元件替代,以实现特定基因的递送和表达。
2.包装质粒(Rep-Cap plasmid)
基本结构:负责表达AAV的Rep和Cap基因。Rep基因编码的蛋白参与AAV基因组的复制和调控;Cap基因编码病毒的结构蛋白,包括VP1、VP2和VP3,这三种蛋白组装成病毒衣壳。
功能:形成AAV病毒的结构蛋白,决定AAV的血清型和组织嗜性。不同的血清型具有不同的组织亲和性,如AAV2.7m8可在肝脏、心脏、肌肉、肺部和中枢神经系统等多种组织中高效递送基因。
3.辅助质粒(pHelper plasmid)
基本结构:包含腺病毒的E2A、E4和VA基因等。
功能:由于野生型AAV是复制缺陷型的,需要依赖辅助病毒才能感染靶细胞。该辅助质粒利用已经明确与调节AAV复制和表达的腺病毒基因产物,通过转染引进宿主细胞,从而确保重组AAV病毒具有感染性,消除AAV对辅助病毒的依赖,解决了AAV生产过程中要去除腺病毒污染的难题。