AAV(腺相关病毒)包装后,病毒的收集时间一般取决于细胞系、转染方法和培养条件。常见的AAV生产体系是293T或HEK293细胞,以下是常规的病毒收集时间参考:
1.最佳收集时间
在常见的HEK293细胞系统中,AAV病毒通常在转染后 48-72小时 达到较高的滴度。这是病毒产量最高的时间段。
2.过早或过晚收集的影响
过早收集(如24小时):可能导致病毒滴度较低,因为病毒尚未充分复制和包装。
过晚收集(超过72小时):细胞可能开始死亡,释放大量细胞碎片,增加下游纯化的难度,并可能降低病毒质量。
3.病毒存在的位置
细胞内病毒:如果目标是收集细胞内的AAV病毒颗粒,建议在转染后48-72小时裂解细胞。
细胞外病毒:部分AAV病毒会分泌到培养基中,因此也可以在48-72小时内收集培养上清。
4.优化收集时间
可以通过qPCR或ELISA检测病毒基因组拷贝数或衣壳蛋白数量,进一步优化收集时间。
显微镜观察细胞状态,确保在细胞大规模凋亡前收集样品,以减少杂质。
5.实验调整
根据实验需求,可以在不同时间点(如24小时、48小时、72小时)收集样品,分析病毒滴度以确定最佳收集时间。