慢病毒(Lentivirus)包装系统在转染细胞后,通常24小时开始产生病毒颗粒,48~72小时达到滴度高峰。以下是一个典型的慢病毒包装时间线:
慢病毒包装时间表(以293T细胞为例):
时间点 | 事件 |
Day 0 | 接种293T细胞,确保第二天转染时细胞密度为70-90% |
Day 1 | 转染包装质粒(三质粒或四质粒系统) |
Day 2 (~24h) | 可开始收集第一批病毒上清(可选) |
Day 3 (~48h) | 收集第二批病毒上清(通常滴度最高) |
Day 4 (~72h) | 可选择收集第三批病毒上清(滴度略低) |
更推荐48小时收集病毒上清:滴度较高,适合后续感染使用或浓缩保存。
可在 收集后立即0.45μm过滤,去除细胞碎片,再进行浓缩或冷冻保存(-80°C)。
病毒在37°C培养条件下容易降解,建议及时收集、过滤和保存。