AAV（腺相关病毒，Adeno-Associated Virus）的包装容量理论上是约 4.7 kb（4700 个碱基），这是其自然病毒衣壳所能容纳的最大单链 DNA 大小（包括 ITRs 在内）。超过这个大小，包装效率会迅速下降，病毒颗粒的质量也会变差，甚至无法形成有效的感染性颗粒。
是否能包装超过 4.7 kb 的序列？
1. 4.7~5.2 kb 范围内：
勉强可以包装，但滴度会明显降低。
病毒颗粒不稳定，基因表达效率低。
可能存在截断或重组风险。
2. 超过 5.2 kb：
极难包装成功。
即使能检测到病毒滴度，往往不具有功能性。
一般不建议尝试。
超载 AAV 的替代策略：
如果你的插入片段超过 4.7 kb，常用的解决方案包括：
✅ Dual-AAV 系统（双病毒系统）
将目标基因分成两部分，分别包装在两个 AAV 中，再通过：
重组策略（Overlap/Hybrid recombination）；
转录后剪接（Trans-splicing）；
Split-intein 系统（蛋白质水平拼接）
使其在目标细胞中重新拼接成完整功能蛋白。
✅ 缩短元件
优化或移除不必要的序列，如：
精简启动子（miniCMV、short CAG 等）
使用更短的 polyA 信号
选择紧凑的调控元件或报告基因
✅ 改用包装能力更强的载体
如：Lentivirus（慢病毒）：包装容量可达 8–10 kb；