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在腺相关病毒（AAV）原液中，常见的杂质主要包括以下几类： 1. 宿主细胞来源的杂质 核酸杂质：宿主细胞残留的基因组DNA或RNA。 蛋白杂质：来自宿主细胞的蛋白质（如HCP，Host Cell Protein）。 内毒素：源自细菌表达系统中的脂多糖。 2. 病毒生产过程相关的杂质 空壳病毒：未包装基因组的AAV病毒空壳。 未成熟病毒：部分组装但功能不完全的病毒颗粒。 残留转染试剂：如聚乙烯亚胺（PEI）或其他转染介质的残留。 3. 其他病毒颗粒相关杂质 组装不完全的病毒颗粒：如缺失部分结构蛋白的颗粒。...

腺相关病毒（AAV）包装对实验室的要求较高，主要涉及以下几个方面： 1. 生物安全等级 AAV包装实验室需要符合一定的生物安全等级要求。虽然AAV本身是非致病性的，但在包装过程中仍需遵循严格的生物安全操作规范，通常要求达到生物安全二级（BSL-2）或更高标准。实验室应配备生物安全柜、高压灭菌器等设备，以防止潜在的生物危害。 2. 无菌操作环境 AAV包装需要在无菌条件下进行，以避免污染。实验室应配备独立的细胞培养室和无菌操作台，细胞培养室需维持在37℃、5% CO₂的环境中。此外，所有操作应在生物安全柜内完成，确保无菌操作。...

scAAV（自互补腺相关病毒）和ssAAV（单链腺相关病毒）是两种常见的AAV载体形式，它们在基因组结构、表达效率、包装容量等方面存在显著差异，具体如下： 1. 基因组结构 ssAAV 基因组是单链DNA（single-stranded DNA）。 在感染宿主细胞后，单链DNA必须通过宿主细胞的DNA聚合酶合成互补链，形成双链DNA（dsDNA）才能进行转录和基因表达。 scAAV 基因组是双链DNA（self-complementary DNA），呈发夹状结构。...

用于动物体内实验的腺相关病毒（AAV）通常需要进行纯化与浓缩，以确保病毒的质量和实验结果的可靠性。以下是相关原因和步骤的简要说明： 为什么需要纯化与浓缩？ 1.去除杂质： AAV生产过程中可能含有宿主细胞碎片、未包装的DNA、蛋白质等杂质，这些可能引发动物免疫反应或干扰实验结果。 2.提高滴度： 动物体内实验通常需要较高浓度的病毒以确保足够的感染效率和实验效果。 3。改善安全性： 纯化后的病毒制剂减少了非目标物质的存在，从而降低对实验动物的毒性。 4.提高实验的可重复性：...

慢病毒感染后细胞生长状态差是一个常见的问题，可能由多种因素引起。以下是一些可能的原因及相应的解决方案： 1. 病毒感染引起的细胞毒性 原因：慢病毒对细胞有一定的毒性，尤其是当MOI（感染复数）过高时，可能导致细胞代谢负担加重，甚至死亡。 解决方案： 降低MOI值，通过预实验确定最佳感染复数。 感染后4小时、8小时、12小时观察细胞状态，若发现细胞状态变差，立即用新鲜完全培养基替换感染液。 2. 目的基因表达的负面影响 原因：外源基因插入宿主基因组后，可能干扰关键基因的表达，影响细胞的正常生长和存活。 解决方案：...

腺相关病毒（AAV）的靶向性/特异性非常好，主要是因为以下几个方面的特性： 1. 天然的组织嗜性 AAV有多种血清型（如AAV1、AAV2、AAV5等）和变体，每种血清型对不同的组织或细胞类型表现出天然的嗜性。这种嗜性由病毒衣壳蛋白的结构决定，它们能够特异性地与细胞表面受体结合。例如： AAV2 对肝脏和神经元具有较强的感染能力。 AAV9 能较好地穿过血脑屏障，靶向中枢神经系统和心肌。 这种天然的嗜性为特定组织或器官的基因治疗提供了基础。 2. 可以通过基因工程增强靶向性...

AAV（腺相关病毒）三质粒系统与野生型AAV相比具有以下显著优势，主要体现在生产效率、安全性、灵活性等方面： 1. 生产效率高 野生型AAV 的基因组包含了所有病毒相关的编码区域，必须经历自然感染过程来增殖，生产效率较低。 AAV三质粒系统 将AAV的功能分离为三个质粒：包装质粒（Rep和Cap基因）、辅助质粒（提供腺病毒的辅助功能，如E1A、E1B等）和载体质粒（携带目标基因）。通过转染宿主细胞（如HEK293细胞），可以在短时间内高效生产病毒颗粒。 2. 安全性高 野生型AAV...

空壳AAV（即不包含目标基因组的病毒颗粒）在实验和基因治疗应用中可能带来多方面的影响，主要包括以下几个方面： 1. 降低治疗效率 空壳AAV不携带有效的基因负载，因此无法实现基因传递和表达。高空壳率会显著降低AAV载体的有效性，因为患者接收到的真正具有治疗功能的病毒颗粒减少。 2. 增加免疫原性 空壳AAV颗粒虽然不携带基因组，但仍然具有完整的衣壳蛋白，能够被免疫系统识别。大量空壳AAV的存在可能引发不必要的免疫反应，增加患者对AAV载体的免疫原性反应。 3. 影响产品纯度...

在AAV滴度检测中，qPCR（实时荧光定量PCR）和ddPCR（数字PCR）是两种常用的定量技术，它们在原理、灵敏度、定量方式和应用场景上存在显著差异。以下是两者的详细对比： 1. 检测原理 qPCR：通过荧光染料或荧光探针监测PCR扩增过程中的荧光强度变化。随着扩增的进行，荧光强度逐渐增加，通过标准曲线来定量目标DNA的浓度。 ddPCR：将样本分成数万个微小液滴，每个液滴中独立进行PCR扩增，通过阳性和阴性液滴的比例，直接计算目标DNA的绝对拷贝数，无需标准曲线。 2. 定量方式...

规范使用AAV病毒产品需要从实验室安全、操作规范、保存条件、废弃物处理等方面入手，以下是具体建议： 实验室安全与操作规范 1.操作环境： AAV病毒操作应在BSL-2级别的生物安全柜中进行。如果使用普通超净工作台，需关闭排风机，避免病毒与外界环境接触。 操作时需穿戴实验服、口罩、护目镜和一次性手套。 2.操作过程： 操作时要小心，避免病毒飞溅或产生气溶胶。若污染台面，需立即用70%乙醇或1%SDS溶液擦拭。 使用密封性良好的离心管进行离心操作，离心后在生物安全柜内打开。...