知识分享

AAV病毒包装质粒主要包括以下几种： 1.表达载体 基本结构：包含ITR序列、启动子、多克隆位点等。ITR序列是AAV基因组的两端各有一个的反向末端重复序列，负责引导病毒载体基因组复制和包装；启动子用于驱动外源基因的表达；多克隆位点则便于外源基因的插入。 功能：用于携带外源基因，将野生型AAV的Rep基因和Cap基因剔除后，用外源基因及表达调控元件替代，以实现特定基因的递送和表达。 2.包装质粒（Rep-Cap plasmid）...

腺相关病毒（AAV）是广泛用于基因治疗的载体，其不同的血清型（分型）在感染细胞时具有不同的生物学特性。这种差异主要体现在宿主细胞的特异性（组织嗜性）、受体识别、感染效率以及免疫反应等方面。 以下是不同AAV分型感染细胞的主要区别：  1.组织嗜性（Tropism） AAV1：对骨骼肌和心肌有高效的感染能力，还能够高效感染脑组织和视网膜细胞，可用于肌肉疾病和神经退行性疾病的基因治疗。 AAV2：具有广谱性，可感染多种细胞类型，如骨骼肌、神经元、血管平滑肌细胞和肝细胞等，但天然感染效率相对较低，常用于眼科基因治疗和肝脏基因转导。...

AAV-PHP.eB（adeno-associated virus PHP.eB）是一种优化的腺相关病毒血清型，与AAV9相比，它在某些方面具有显著的优势，特别是在基因治疗和神经科学研究中。以下是它相较于AAV9的主要优势： 1. 更高的中枢神经系统感染效率 AAV-PHP.eB经过工程化优化，能够更高效地跨越血脑屏障（BBB），从而在中枢神经系统（CNS）中的转导效率显著提升。研究显示，在小鼠模型中，AAV-PHP.eB的全脑转导效率比AAV9高数倍，这意味着它能够更加均匀和强效地传递基因载体到大脑和脊髓。 2....

AAV感染后荧光消失可能有以下原因： 1.病毒相关因素 病毒滴度过低：如果在病毒包装过程中出现问题，如转染效率低、细胞培养条件不佳或者纯化步骤损失过多病毒颗粒，都会导致获得的病毒滴度不高。低滴度的病毒在感染细胞时，能够与细胞表面受体结合并进入细胞的病毒数量有限，从而影响感染效率，导致荧光蛋白表达不足，最终荧光消失。 病毒血清型选择不当：AAV有多种血清型，每种血清型对不同细胞类型的亲嗜性不同。如果选择的血清型与目标细胞不匹配，感染效率会较低，进而影响荧光蛋白的表达和荧光的观察。...

AAV（腺相关病毒，Adeno-Associated Virus）对照组病毒在科学研究中主要用作实验对照，其作用包括以下几个方面： 1. 验证载体的影响 在基因治疗或实验中，研究者通常使用AAV载体来传递目标基因。AAV对照组病毒通常不携带目标基因或携带一个无功能的对照序列（如绿色荧光蛋白GFP或空载体），以便评估AAV载体本身对实验对象（如细胞或动物）的影响。 2. 排除非特异性效应...

慢病毒转染实验通常需要在BSL-2或BSL-2+等级的实验室中进行。 实验室等级 BSL-2：这是基础实验室的2级生物安全水平，适用于初级卫生服务、诊断和研究。 BSL-2+：在BSL-2的基础上，增加了更严格的操作规范和防护措施。   BSL-2 实验室的基本要求 1.实验室环境 实验室门应有锁，确保未经授权人员不能进入。 生物安全柜（Biosafety Cabinet，BSC-2级别）必须用于操作慢病毒，以防止气溶胶暴露。 专门的生物废弃物处理区域，用于处理含有慢病毒的废液和耗材。 2.个人防护装备（PPE）...

慢病毒包装后病毒释放的时间通常在转染后的24-72小时之间，具体如下： 24小时：转染后大约24小时需要更换培养基，此时细胞开始产生病毒颗粒，但释放量较少，一般不进行收集。 48小时：转染后48小时是病毒释放的高峰期之一，此时可以收集含慢病毒的上清进行后续实验。 72小时：转染后72小时也是病毒释放较多的时期，可再次收集病毒上清，以获取更多的病毒颗粒。...

AAV病毒（腺相关病毒，Adeno-Associated Virus）是一种常用的基因治疗载体，因其较高的安全性和低免疫原性被广泛应用于基因治疗和基因研究中。以下是关于AAV病毒安全性的主要信息： 1. 低致病性 AAV本身是非致病性病毒，未被发现与人类疾病相关。这使其成为一种较为安全的基因治疗工具。 2. 基因组整合 AAV病毒的基因组整合风险较低，主要以非整合方式存在于宿主细胞中。 不过，在某些情况下，特别是在使用较高剂量时，仍存在一定的基因组整合可能性，理论上可能导致基因突变或癌症风险，但该概率较低。 3. 免疫反应...

1. 载体质粒（Transfer Plasmid） 作用：载体质粒包含目的基因和转录调控元件。目的基因由启动子驱动，在感染细胞中表达。 关键组成： 启动子（如 CMV、EF1α等） 目的基因 报告基因（如 GFP、RFP 等，视实验需求而定） 包装信号（Ψ序列，用于将 RNA 包装成病毒颗粒） LTR（长末端重复序列） 2. 包装质粒（Packaging Plasmid） 作用：提供慢病毒颗粒组装所需的核心蛋白，但这些蛋白不会整合到病毒基因组中。 关键组成： Gag（基因组装蛋白）：负责病毒核心的形成。...

慢病毒的保存时间取决于保存条件，以下是不同保存条件下的保存期限及注意事项： 短期保存 4℃保存：如果在短时间内（数小时至数天）使用慢病毒，可以将病毒置于4℃保存。但为了保持病毒滴度，建议在一周内使用完毕。如果需要更长时间的保存，建议将慢病毒分装后放置于-80℃以长期保存。 长期保存 -80℃保存：对于需要长期保存的慢病毒，建议将病毒分装后放置于-80℃。在-80℃条件下，慢病毒可以保存6个月以上。但如果病毒储存时间超过6个月，在使用前需要重新测定病毒滴度。一般情况下，慢病毒在-80℃可存放1年。 其他注意事项...