知识分享

AAV辅助质粒（AAV helper plasmid）是用于腺相关病毒（AAV）生产和包装的重要工具，其主要作用是提供AAV复制和包装所需的辅助因子。这些因子通常由腺病毒（Adenovirus）天然提供，但通过使用AAV辅助质粒，可以在无腺病毒的情况下实现AAV载体的生产，降低病毒污染的风险。 具体作用 1.提供腺病毒辅助基因： AAV本身无法独立复制，需要依赖腺病毒的辅助基因来完成其生命周期。辅助质粒通常携带关键的腺病毒基因，如 E2A、E4 和 VA RNA，这些基因能够激活AAV基因组的复制和包装。...

腺相关病毒（AAV）的血清型选择对于靶向不同组织（如肝脏）具有重要影响。对于肝脏感染，以下几种AAV血清型通常被认为最有效： 1.AAV8 AAV8 是目前广泛用于肝脏靶向的血清型之一。它具有高度的肝脏亲和性和较低的免疫反应性，同时在体内表现出较高的基因转导效率。 2.AAV9 AAV9 也显示出良好的肝脏转导能力，并且能够跨越血脑屏障，适用于需要全身递送的情况。 3.AAV2 虽然 AAV2 是最早被研究的血清型，且具有一定的肝脏转导能力，但其转导效率通常低于 AAV8 和 AAV9。不过，通过工程化改造，AAV2...

提高腺相关病毒（AAV）感染动物的效率可以从以下几个方面入手，主要是优化实验设计、病毒生产、注射方法和后续管理： 1. 选择合适的AAV血清型 不同的AAV血清型对不同组织和细胞的感染效率不同。选择合适的血清型可以显著提高感染效率： AAV9：用于全身感染、心脏和神经系统。 AAV8：对肝脏感染效率高。 AAV2：广泛用于神经元和体外研究。 AAV-DJ：融合型血清，适合多组织高效感染。 建议：根据目标组织和实验目的选择最佳的血清型。 2. 优化病毒载体设计 启动子：选择能高效表达目标基因的启动子（如...

AAV感染后出现过表达效果弱的问题可能由多个因素导致，可以从以下几个方面进行排查和优化： 1. 病毒质量问题 （1）病毒滴度不足：检查病毒制备时的滴度（GC/mL或VG/mL），过低的滴度会导致感染效率低下。 解决方案：制备更高滴度的病毒或增加注射量。 （2）病毒纯度不够：杂质可能影响感染效率。 解决方案：优化纯化方法（如CsCl梯度离心或FPLC）确保病毒纯净度。 （3）病毒失活：冷冻/解冻次数过多或储存条件不当可能导致病毒活性下降。 解决方案：分装后储存于-80℃，避免反复冻融。 2. 组织靶向性...

在使用腺相关病毒（AAV）载体在动物体内表达目的基因时，需要注意以下关键点： 1. AAV载体选择 血清型选择：AAV有多个血清型（如AAV1至AAV9及AAVrh系列），不同血清型具有不同的组织嗜性。例如： AAV9：对中枢神经系统和心脏有高效传染能力。 AAV8：常用于肝脏靶向。 AAV5：对呼吸道和中枢神经系统有效。 根据实验需求选择适合的血清型以提高靶向性。 启动子选择： 使用合适的启动子可以控制目的基因的表达模式（组织特异性或全局表达）。...

腺相关病毒（AAV）血清型的主要区别体现在以下几个方面： 1. 衣壳蛋白序列和结构 不同的AAV血清型具有不同的衣壳蛋白（VP1、VP2、VP3）序列，这直接决定了衣壳的表面结构。 衣壳蛋白序列的变化影响病毒与宿主细胞受体的结合，从而影响其细胞和组织特异性。 2. 宿主受体识别 不同的AAV血清型通过识别不同的细胞表面受体进入细胞。例如： AAV2：与肝素硫酸糖胺聚糖结合。 AAV5：识别唾液酸。 AAV9：通过糖基化受体与细胞结合。 这种差异决定了血清型在体内的组织特异性和感染效率。 3. 组织嗜性（Tropism）...

在使用腺相关病毒（AAV）载体感染动物后，观察不到荧光或荧光微弱可能与以下几个因素有关： 1. 病毒滴度不足 AAV的感染效率与病毒的滴度密切相关。如果注射的病毒滴度过低，可能导致靶组织或细胞中表达的荧光蛋白量不足，从而荧光信号较弱或不可见。 2. 感染效率问题 靶细胞类型：不同的AAV血清型对不同的细胞和组织有特异性。例如，某些血清型对神经细胞有高亲和力，而对其他细胞可能不高。 递送方式：注射部位（如局部注射、尾静脉注射）和方法可能会影响病毒的分布与感染效率。 屏障问题：如血脑屏障可能限制病毒进入中枢神经系统。 3....

是的，长期保存的病毒在使用前通常需要重新检测。这是因为病毒在长期保存过程中可能会受到以下因素的影响： 1.活性降低：病毒在保存过程中可能因保存条件（如温度、湿度、保存介质的质量）而逐渐失去活性或感染能力。 2.污染风险：如果保存过程中发生了意外（如保存容器泄漏或灭菌失败），病毒可能受到其他微生物或化学物质的污染。 3.遗传变异：某些病毒可能在长期保存期间发生遗传变异，导致其特性（如感染力或抗原性）发生变化。 4.保存条件变化：保存环境的波动（如冷冻设备故障、温度升高等）可能会影响病毒的稳定性。...

慢病毒（Lentivirus）纯化后，为确保其长期保存并维持活性，可以采取以下措施： 1.分装保存 将纯化后的慢病毒分装到小体积的冻存管中，这样可以减少反复冻融的次数，避免降低病毒滴度。 2.避免反复冻融 反复冻融会降低病毒滴度，每次冻融可能会降低病毒滴度10%左右。因此，应尽量避免反复冻融，并根据每次的使用量对病毒进行分装。 3.短期保存 如果在短时间内（一周内）使用慢病毒，可以将病毒置于4℃保存。 4.长期保存 对于需要长期保存的慢病毒，建议将病毒分装后放置于-80℃。 5.使用封口膜封口...

慢病毒纯化是慢病毒载体研究和生产的重要环节，保证其高滴度和高纯度对后续实验和应用至关重要。以下是慢病毒纯化的关键要点： 1. 病毒收集 时间选择：慢病毒通常在转染后48-72小时达到最高滴度，需在此时间段内收集培养基。 收集次数：可以多次收集上清液（如48小时和72小时），以提高总产量。 离心去杂质：初步去除细胞碎片和杂质，通常以低速离心（如1500-2000 rpm，10分钟）清除细胞残留。 2. 过滤 孔径选择：使用0.45 μm或0.22 μm滤膜过滤培养上清液，以进一步去除较大的颗粒和细胞碎片。...