知识分享

慢病毒（Lentivirus）在 4°C（冰箱冷藏温度） 下的存活时间取决于多个因素，包括病毒颗粒的纯度、制备方法、储存缓冲液和环境条件等。以下是一些常见的情况： 1.病毒颗粒的稳定性：慢病毒在4°C下的活性通常会在几天到一周内逐渐降低。如果需要保存较长时间，建议储存在 -80°C 条件下。 2.储存缓冲液：如果病毒颗粒被悬浮在稳定的缓冲液（如DMEM或PBS，含有10%的血清或其他蛋白保护剂）中，存活时间可能稍长，但仍不适合长期存储。 3.实际实验经验：...

慢病毒（Lentivirus）和慢病毒载体（Lentiviral vector）是两个密切相关但有重要区别的概念，具体来说： 1. 慢病毒 定义：慢病毒是一类逆转录病毒家族中的成员，属于Retroviridae科，是一种天然存在的病毒，如人类免疫缺陷病毒（HIV）就是一种慢病毒。 慢病毒特性： 慢病毒可以感染分裂和非分裂细胞。 它具有稳定整合到宿主细胞基因组的能力，从而可以长期表达。 慢病毒在自然界中是致病性的，例如HIV会导致艾滋病。   2. 慢病毒载体...

慢病毒载体（Lentiviral vectors）在基因转导中通常有较高的感染效率，但其效率的高低受到多种因素的影响。若你遇到感染效率较低的情况，可能的原因包括： 1.病毒包装制备问题：慢病毒的制备过程中，若病毒颗粒的纯度或浓度较低，感染效率也会受到影响。确保病毒产量和质量符合要求，可能需要优化病毒包装和纯化步骤。 2.病毒运输和保存：病毒的运输和保存方式也会影响其活性。解冻病毒应在冰上进行，避免反复冻融，以保持病毒滴度。...

慢病毒感染后无荧光，可能涉及多个方面的问题。可以从以下几个角度进行排查和解决： 1. 慢病毒本身的问题 病毒滴度过低：病毒滴度不够，导致感染效率低，无法看到荧光。 解决方案：检测病毒滴度（如通过 qPCR 或流式细胞术），提高病毒的浓度。 病毒载体构建问题：荧光基因可能未成功整合到慢病毒载体中。 解决方案：重新测序或 PCR 验证慢病毒载体，确保荧光基因正确插入。 病毒失活：病毒在制备、储存或运输过程中失活。 解决方案：使用新鲜制备的病毒，并确保病毒储存条件合适（如-80℃保存）。 2. 细胞因素...

腺相关病毒（AAV）包装失败可能由多种因素引起，涉及质粒设计、细胞状态、生产工艺和实验操作等方面。以下是一些常见的原因： 1.外源基因大小限制 AAV的基因组较小，大约只有4.7kb，这限制了可以插入的外源基因的大小。过大的外源基因或过长的启动子序列可能会导致AAV包装时构建不稳定，从而失败。 2.细胞问题 细胞状态不佳：包装使用的细胞株（如HEK293、HEK293T）状态不佳、活性降低，影响转染效率和病毒颗粒产量。细胞污染（细菌、支原体、真菌污染等），导致病毒包装失败。...

腺相关病毒(AAV)感染效率不高的原因可能包括以下几点： 1.病毒制备和保存问题：病毒包装制备可能存在问题，例如外源基因是否正确、病毒滴度是否合格等。病毒的运输和保存方式也会影响其活性，尽管AAV病毒相对稳定，但应避免反复冻融以减少对病毒滴度的不利影响。 2.组织特异性问题：不同的AAV血清型具有不同的感染特性和组织嗜性，选择合适的血清型对于提高感染效率至关重要。AAV血清型、启动子、注射方式以及注射量都是影响AAV病毒感染效率的重要因素。...

AAV载体的制备是一个多步骤的过程，包括质粒构建、细胞培养、转染、病毒收获、纯化及质量控制等环节。整个过程需要严格的操作标准和质量把控，确保最终获得高效、高纯度的病毒载体。以下是AAV（腺相关病毒）载体的制备过程几个关键步骤。 1. 质粒准备与构建 AAV载体的制备需要以下几种质粒： 重组质粒（载体质粒）： 包含目的基因（转基因）和AAV的反向末端重复序列（ITRs）。 辅助质粒（帮助质粒）： 提供AAV复制所需的辅助功能，通常包括腺病毒的辅助基因（如E2A、E4和VA基因）。 包装质粒：...

腺相关病毒（AAV）在基因治疗和分子生物学研究中广泛使用，其表达时间取决于以下几个因素： 1. 病毒感染后的起始表达时间 AAV通常在感染宿主细胞后需要一段时间才能开始表达外源基因。 表达起始时间：通常在感染后 24-48小时，可以检测到外源基因的表达。 表达起始时间与宿主细胞类型、病毒血清型、外源基因以及启动子的选择相关。 2. 高水平表达的时间点 AAV的外源基因表达会逐步增强，达到稳定表达水平。 高水平表达时间：通常在 5-7天后达到较高水平。...

慢病毒载体（Lentiviral vector）和腺相关病毒载体（Adeno-associated virus, AAV）是两种常见的基因传递工具，各有其独特的优势和适用场景。以下是慢病毒载体相较于腺相关病毒载体的主要优势： 1. 基因插入的持久性 慢病毒载体：能够整合到宿主基因组中，从而实现外源基因的长期稳定表达，非常适合需要持久性基因表达的研究和治疗，如慢性疾病治疗和干细胞基因编辑。 腺相关病毒载体：主要以非整合方式存在，外源基因表达通常是暂时性的，尤其是对于快速分裂的细胞，其表达可能会逐渐丧失。 2. 载体容量...

慢病毒纯化是确保病毒具有高效性和纯度的重要步骤。 一、常用的慢病毒纯化方法： 1. 超速离心法（密度梯度离心） 原理：利用病毒颗粒与其他杂质在密度上的差异，通过超速离心分离病毒。 优点：纯度较高，可去除较多杂质。 缺点：操作复杂，可能影响病毒感染效率。 2. 超滤浓缩 原理：通过超滤膜将病毒颗粒浓缩，同时去除小分子杂质（如培养基成分和游离蛋白质）。 优点：操作简便，适合处理大体积样品。 缺点：病毒颗粒可能损失部分活性。 3. PEG沉淀法（聚乙二醇沉淀） 原理：利用PEG与病毒颗粒结合，促进病毒沉淀。 优点：成本低、操作方便。...