知识分享

AAV（腺相关病毒）出现“空壳病毒”的原因主要与其包装过程中的不完全装配有关。下面是详细解释： 什么是空壳病毒？ 空壳病毒是指未封装基因组DNA的AAV病毒颗粒，它们外壳完整，但内部不含或只含部分病毒基因组。 空壳产生的原因： 1.包装效率不高 AAV在293细胞等宿主中通过三质粒共转染系统进行包装。整个过程涉及多个步骤，包括基因组DNA的复制、衣壳蛋白的表达和基因组装入衣壳中。如果装配过程没能及时、正确地将DNA装进衣壳，就会形成空壳。 2.基因组装载速度慢...

研究概述 2025年3月28日，马萨诸塞大学chan医学院Horae 基因治疗中心高光坪（Guangping Gao）教授团队在Molecular Therapy期刊发表标题为“The curious case of AAV immunology”的综述论文，该综述主要探讨了腺相关病毒（AAV）免疫学的复杂性，包括AAV与宿主免疫系统的相互作用、临床应用中的免疫挑战以及未来研究方向。   导读...

慢病毒（Lentivirus）包装系统在转染细胞后，通常24小时开始产生病毒颗粒，48~72小时达到滴度高峰。以下是一个典型的慢病毒包装时间线： 慢病毒包装时间表（以293T细胞为例）： 时间点 事件 Day 0 接种293T细胞，确保第二天转染时细胞密度为70-90% Day 1 转染包装质粒（三质粒或四质粒系统） Day 2 (~24h) 可开始收集第一批病毒上清（可选） Day 3 (~48h) 收集第二批病毒上清（通常滴度最高） Day 4 (~72h) 可选择收集第三批病毒上清（滴度略低）  ...

AAV（腺相关病毒，Adeno-Associated Virus）是一种常用于基因治疗和基因编辑研究的载体。为了确保AAV制剂的安全性和有效性，在制备过程中进行严格的质量控制（Quality Control, QC）是非常重要的。 下面是AAV常见的质量控制项目及其检测方法： 一、滴度检测（Titer Measurement） 1.基因组滴度（gDNA titer / vg titer） 表示病毒颗粒中携带的基因组数（viral genome, vg）。 常用方法：qPCR 或...

AAV病毒感染后GFP荧光不够亮，可能由以下几种因素导致： 1. 感染效率低 滴度不够高：感染的病毒颗粒数量太少，导致细胞中表达的GFP不足。 MOI太低：Multiplicity of Infection（感染复数）设置不当，单位细胞获得的病毒颗粒太少。 细胞类型不敏感：不同细胞对AAV血清型的敏感性不同，比如某些细胞不适合你使用的AAV血清型（如AAV2、AAV9等）。 2. 表达启动子问题 启动子弱或不适配：使用的启动子（如CMV、EF1α、CAG等）在某些细胞中活性较低，导致GFP表达水平不高。 3....

慢病毒（lentivirus）转染过程中，换液时间的选择对转染效率和细胞活性都有重要影响。以下是常见的换液时间点及其考虑因素： 一般推荐的换液时间： 转染后 8–24 小时之间换液，具体如下： 换液时间 适用情况 优点 缺点 8 小时 对病毒较敏感的细胞（如神经元、干细胞） 减少病毒毒性，提高细胞活力 可能影响转染效率 12–16 小时 多数常规细胞系（如HEK293T、HeLa） 在效率与细胞活力间取得平衡 — 24 小时 对病毒毒性耐受的细胞 最大化转染效率 某些细胞可能状态变差   注意事项：...

三质粒包装系统，是用于腺相关病毒 AAV等病毒载体系统生产中的一种常用策略，目的是实现高效、安全地包装病毒颗粒。这个系统常用于腺相关病毒（AAV）的生产，尤其是在基因治疗、病毒介导的基因转染等领域非常常见。 一、rep/cap 质粒（Replication and Capsid Plasmid） 主要功能：提供病毒的复制（rep）和衣壳蛋白（cap）编码基因。 适用范围：这个术语常用于 AAV 包装系统中。 rep基因编码病毒复制所需的蛋白。 cap基因编码形成病毒外壳的蛋白，决定了病毒血清型（如AAV2、AAV9等）。...

腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）适合用于感染细胞，尤其是在基因治疗和实验室研究中被广泛应用。   1. AAV的适用性优势 安全性高： AAV是非致病性病毒，天然缺乏复制能力，需依赖辅助病毒（如腺病毒）才能复制。在基因治疗中使用的AAV载体通常被设计为复制缺陷型，进一步降低风险。 基因组不整合：野生型AAV会定点整合到人类19号染色体，但重组AAV载体通常以游离体形式存在细胞核中，避免随机插入导致的突变风险。 低免疫原性：...

AAV（腺相关病毒）在应用中可能出现病毒颗粒聚集（aggregation）现象，这种聚集对实验和临床应用都会产生一定的负面影响。   一、AAV聚集的影响 1. 滴度测定不准确 聚集体中多个AAV粒子被统计为一个单位，导致通过qPCR、ELISA等方法测得的滴度偏低或不稳定。 2. 感染效率降低 聚集的AAV不易被细胞摄取，尤其是在低MOI（Multiplicity of Infection）条件下； 聚集可能阻碍病毒颗粒与细胞膜受体的结合； 聚集还可能引发非特异性吸附或沉降，导致分布不均。 3. 免疫原性增强...

近日， Atsena Therapeutics宣布其在研基因治疗产品 ATSN-201 获得美国FDA授予的“再生医学先进疗法（RMAT）”认定，用于治疗X连锁性视网膜劈裂症（XLRS）。这标志着ATSN-201已获得FDA四项关键认定包括： RMAT（再生医学先进疗法）   Fast Track（快速通道）   Rare Pediatric Disease（罕见儿科疾病）   Orphan Drug（孤儿药认定）    关于X连锁性视网膜劈裂症（XLRS）...