知识分享

腺相关病毒6型（AAV6）在基因治疗中与其他AAV血清型相比，确实有一些显著优势。以下是AAV6的几个主要特点： 高效的组织穿透性和转染效率：AAV6在骨骼肌、心肌和肺部组织中表现出较强的穿透能力和高效的转染率。它的组织亲和性较高，使其在这些组织中的基因传递更加有效。 较少的免疫反应：相较于AAV2、AAV9等血清型，AAV6通常引发的免疫反应较轻微。这可以减少患者体内的炎症反应，有助于提高基因治疗的安全性和可行性。...

什么是慢病毒（LV）？ 慢病毒载体（Lentiviral vectors, LVs）是在人免疫缺陷病毒（HIV-1病毒）基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（或RNAi）导入动物和人的原代细胞或细胞系，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体基因组是单股正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。 慢病毒（LV）的优势...

慢病毒载体（Lentiviral vector）的构建流程一般包括以下几个步骤： 1. 设计和合成目的基因 确定目的基因序列：根据实验需求，设计特定的基因序列，或从基因库中选择现成的基因。 设计引物：根据目的基因的上、下游序列设计引物，便于后续的PCR扩增。   2. 构建慢病毒载体质粒 选择载体骨架：常用的慢病毒载体通常含有增强子的LTR、包装信号ψ（Psi）、以及用于插入目的基因的多克隆位点（MCS）等。...

慢病毒是一种基于逆转录病毒的病毒载体系统，常用于基因治疗和基因编辑中的基因递送。慢病毒载体常用HIV-1的基因组为基础，通过改造使其不具有复制性，从而确保安全性。慢病毒的包装和细胞侵染大致可以分为以下几个步骤： 慢病毒包装机制 准备质粒：慢病毒包装通常需要三种质粒： 转移质粒（Transfer plasmid）：携带目标基因以及相关的启动子和报告基因（如GFP或mCherry）。 包装质粒（Packaging plasmid）：提供病毒的结构蛋白和酶（如Gag、Pol）。 包膜质粒（Envelope...

慢病毒（Lentivirus）转染细胞是一种基因转导方法，它利用慢病毒载体将外源基因导入细胞中，从而实现基因表达调控。慢病毒载体是一种基于HIV-1（人类免疫缺陷病毒）改造的病毒载体，具有感染范围广、能够整合入宿主基因组、稳定表达等特点，广泛应用于分子生物学研究和基因治疗中。 慢病毒转染细胞的原理主要包括以下几个步骤： 病毒颗粒的制备： 慢病毒载体通常由四个主要部分组成：包装质粒（packaging plasmid）、逆转录酶质粒（reverse transcriptase plasmid）、VSV-G包膜蛋白质粒（VSV-G...

AAV PHP.eB和AAV9都是腺相关病毒（AAV）载体的变体，常用于基因治疗中将治疗性基因递送到特定组织或细胞。虽然它们在应用中有相似之处，但在安全性和特异性方面存在一些差异。 1. 跨血脑屏障的能力 AAV9：可以通过静脉注射穿越血脑屏障（BBB），进入中枢神经系统（CNS），但效率较低，需要较高剂量来达到足够的效果。 AAV PHP.eB：是从AAV9改造的变体，具有更强的跨血脑屏障能力。它能够更有效地进入脑组织，且在更低剂量下实现更高的神经元转导效率。因此，AAV...

腺相关病毒AAV PHP.eB在基因治疗领域的潜力主要体现在以下几个方面： 高效的血脑屏障穿透能力： AAV PHP.eB是一种新型的AAV载体，它在体内进化而来，相较于现有的AAV9，能更有效地穿过血脑屏障（BBB）。这对于中枢神经系统（CNS）的基因治疗尤为重要，因为BBB为CNS提供了强有力的保护，同时也使得药物和其他分子的递送变得极为困难。实验发现，当需要穿过BBB时，AAV PHP.eB在静脉注射后比AAV9产生更高的CNS转导效率。 广泛的CNS转导： AAV...

质粒载体和病毒载体都是常用于基因工程中的工具，用于将外源基因导入细胞。然而，它们的结构、功能、应用和传递机制等方面存在显著差异。 以下是它们的主要异同： 共同点 基本功能：两者都可以作为基因的载体，用于引入和表达外源基因。 用于基因操作：质粒载体和病毒载体都广泛用于分子生物学研究和基因治疗领域，以改变或调控细胞功能。 携带元件：两者都可以携带多种基因元件，比如启动子、抗性基因、报告基因等，以实现不同的表达控制和选择。   不同点 特点 质粒载体 病毒载体 来源 通常来源于细菌的小型环状DNA 改造自病毒的基因组 结构...

从科研级到临床级AAV病毒包装，涉及到的主要变化和要求可以总结如下： 生产和质控标准： 科研级：科研级AAV病毒包装主要满足基础研究的需求，质量控制相对宽松，主要通过传统的病毒滴度测定和基本的纯度检测。 临床级：临床级AAV病毒包装必须遵循GMP（Good Manufacturing Practice）标准，进行更为严格和全面的质量控制，包括高纯度、高滴度、内毒素水平、完整衣壳比率等的检测和验证。 纯化和浓缩： 科研级：可能只进行基本的纯化步骤，如PEG（聚乙二醇）沉淀法。...

近期Signal Transduction and Targeted Therapy杂志（IF=40.5）上发表了一篇重量级AAV基因治疗综述文章（通讯作者为美国马萨诸塞大学Chan医学院的高光坪教授），深入探讨了AAV基因治疗的最新突破与未来趋势。这篇文章不仅汇聚了行业内的权威观点，更揭示了关键技术的最新动态，为学术界和产业界的创新提供了全新启发。上两篇我们分别学习了AAV的基础知识和AAV的载体开发，下面我们继续探索关于AAV的生产工艺。 方法概述...