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质粒和慢病毒载体是基因编辑中常用的两种载体系统，但它们在结构、传递效率和应用范围上存在显著差异。 1. 结构和组成 质粒：质粒是一种小型环状DNA分子，通常存在于细菌中。它可以携带目的基因片段，具有简单的结构，容易设计和制备。质粒不具备病毒成分，也不会引发免疫反应。 慢病毒载体：慢病毒载体源于慢病毒，如人类免疫缺陷病毒 (HIV)，通过改造去除了致病性，仅保留了病毒感染能力和携带基因的特性。慢病毒具有包膜结构，可用于将遗传物质插入宿主细胞的基因组中。   2. 基因传递效率...

质粒和慢病毒载体是两种不同的基因递送工具，它们在基因治疗和分子生物学研究中有着各自的应用和特点。以下是它们之间的主要区别： 1、分子结构： 质粒：是一种小型的、通常是环状的DNA分子，可以在细菌和酵母中复制和传递。它们通常用于克隆和表达外源基因。 慢病毒载体：基于慢病毒（如HIV）的基因递送系统，经过改造后用于将外源基因递送到宿主细胞中。慢病毒载体通常包含病毒的长末端重复序列（LTRs）和必要的包装信号。 2、宿主范围： 质粒：主要在原核生物（如细菌）中复制，也可以在真核生物（如酵母）中使用，但不能直接在哺乳动物细胞中复制。...

AAV（腺相关病毒）三质粒包装系统是一种常用的基因转移工具，主要用于在细胞和动物模型中转入基因，研究基因功能或开发基因治疗方案。AAV的三质粒包装系统通常包括以下三个质粒： 载体质粒（Transfer plasmid）：包含目的基因序列（即希望转入细胞的基因）以及AAV的反向末端重复序列（ITRs），ITRs是AAV基因组的两端序列，负责包装和整合功能。AAV没有自己的复制蛋白，所以ITRs序列的存在可以让目的基因在病毒包装时被识别并嵌入病毒颗粒中。 包装质粒（Packaging...

Cas9 质粒（plasmid）是一种常用于基因编辑技术中的工具，尤其是在 CRISPR-Cas9 系统中。质粒是一种小型的环状 DNA 分子，常用于将特定的基因片段转入细胞中。在 CRISPR-Cas9 基因编辑系统中，Cas9 质粒的作用和目的是： 表达 Cas9 蛋白：Cas9 是一种核酸酶，可以精确地剪切 DNA。质粒携带了 Cas9 基因，能在宿主细胞中被转录和翻译成 Cas9 蛋白，使得细胞获得编辑基因组的能力。 传递 sgRNA（单导 RNA）：很多 Cas9 质粒不仅携带了 Cas9 基因，还包括了设计好的单导...

以下是慢病毒感染细胞的实验步骤，供您参考： 1. 实验准备 材料准备： 慢病毒颗粒：可以是购买的预制病毒，也可以自己构建和包装。 目标细胞：已培养到适合感染的状态，一般在30-50%汇合度时效果较好。 多聚物增强剂（如Polybrene，选用）：可以增加病毒感染效率。 必要的培养基、抗生素（如有抗性筛选）和PBS等。 无菌处理工具和细胞培养环境。 试剂准备： 计算所需的病毒颗粒量：通常根据感染复数（MOI）计算。 若需要筛选抗性细胞，请准备抗性筛选试剂（如青霉素、嘌呤霉素等）。 2. 细胞接种...

慢病毒包装质粒是构建慢病毒载体系统中用于生成慢病毒颗粒的关键组件。常见的慢病毒包装系统包括一系列质粒，每种质粒负责提供不同的病毒蛋白和元件以确保病毒的组装和包装。典型的慢病毒包装质粒种类如下： 包装质粒（Packaging Plasmid） 包含慢病毒的主要结构蛋白和酶，例如gag、pol、rev等基因。这些基因对于病毒的装配和逆转录功能至关重要。包装质粒不含env基因，以增强病毒的安全性，防止自我复制。 包膜质粒（Envelope Plasmid）...

腺相关病毒（AAV）载体的制备是基因治疗研究中非常关键的一步。AAV因其安全性高、免疫原性低等优点，广泛用于基因转导。AAV载体的制备过程一般包括以下关键步骤： 1. 选择并构建表达质粒 基因插入：首先选择目标基因，并构建适合的表达质粒。通常包含目标基因的表达盒、启动子、IRES（内转录增强子）和标记基因。 质粒设计：需要设计AAV质粒和辅助质粒。AAV质粒含有目标基因和AAV的反向末端重复序列（ITR），辅助质粒则携带AAV的结构基因（如Rep和Cap基因）。 2. 转染细胞...

在基因治疗中，腺相关病毒（AAV）载体相对于其他病毒载体（如腺病毒或逆转录病毒）有许多独特的优势，具体包括以下几个方面： 低致病性和低免疫反应 AAV本身是非致病性病毒，因此不会引发显著的免疫反应。在体内应用时引发的免疫反应较轻，这有助于减少患者对AAV载体产生抗体的可能性，从而提高治疗的安全性和可重复性。 持久性表达 AAV能够将基因片段稳定地整合到细胞外显子的核周区域，而不易插入宿主基因组。这种特性让AAV载体能在非分裂细胞（如神经细胞、肌肉细胞等）中长期表达目标基因，从而在单次给药后产生持久的治疗效果。 可选择不同的血清型...

AAV（腺相关病毒）包装质粒在基因治疗中起着关键作用，主要用于将治疗基因包装成AAV载体，进而转导（传递）至目标细胞。AAV载体以其低致病性、低免疫原性和长效表达等优点，被广泛应用于基因治疗的多个方面。以下是AAV包装质粒在基因治疗中的具体应用： 单基因遗传性疾病治疗 AAV包装质粒广泛用于治疗单基因缺陷导致的遗传性疾病，例如杜氏肌营养不良症（DMD）、X连锁视网膜色素变性等。通过将正常基因插入AAV包装质粒，构建含有健康基因的AAV载体，递送至患者体内以弥补缺陷基因功能。 神经系统疾病治疗...

在2024年10月23日至27日举行的美国肾脏病学会（ASN）--肾脏周（Kidney Week）上，专注于肾脏疾病基因治疗的公司Purespring Therapeutics展示了AAV的基因疗法PS-002的临床前数据。结果显示，该疗法能有效靶向肾脏足细胞，在小鼠和猪模型中减轻IgA肾病的疾病表现，降低炎症并减少肾脏纤维化，且未见与治疗相关的副作用。...