AAV（腺相关病毒）滴度检测是 AAV 生产和研究中至关重要的一步。常见的 AAV 滴度检测方法包括以下几种：
1. qPCR（定量PCR）
原理：通过荧光定量PCR检测AAV基因组（vg，viral genome），常检测 ITR 区域或特定的转基因片段。
优点：灵敏度高，重复性好，适用于绝对定量。
缺点：不能区分完整和缺失基因组的病毒颗粒。
2. ddPCR（数字PCR）
原理：采用数字PCR技术，对 AAV 样本进行绝对定量，能够提高准确性。
优点：无需标准曲线，精确度高，可检测低拷贝样本。
缺点：仪器昂贵，实验时间较长。
3. ELISA（酶联免疫吸附实验）
原理：利用特异性抗AAV衣壳蛋白（如AAV VP1/VP2/VP3）的抗体，检测病毒颗粒的总数（vp，viral particle）。
优点：操作简便，可用于不同血清型的AAV检测。
缺点：不能区分感染性和非感染性病毒颗粒。
4. TCID50（组织培养感染剂量法）
原理：将 AAV 作用于宿主细胞，检测细胞病变（CPE）或荧光标记蛋白表达情况，计算半数感染剂量（TCID50）。
优点：可评估病毒的感染性滴度（ifu，infectious units）。
缺点：耗时长，操作较繁琐，依赖细胞系和病毒的感染效率。
5. 流式细胞术
原理：AAV 感染细胞后表达荧光蛋白，通过流式检测带有荧光的细胞比例，计算感染性滴度。
优点：直观且可定量感染率。
缺点：依赖于报告基因，不能直接用于非标记的AAV载体。
6.电镜法
原理：直接观察病毒颗粒的形态，并统计完整与空壳的比例。
优点：可直接观察病毒颗粒形态并区分完整与空壳病毒。
缺点：成本高，定量能力有限，依赖于操作人员经验。
不同方法各有优缺点，在实际应用中通常结合多种方法使用，例如 qPCR/ddPCR 结合 ELISA和电镜法，以获得更全面的 AAV 滴度信息。