CRISPR/Cas9质粒构建
CRISPR/Cas9合成简单、周期短、操作简单、效率高，是目前研究最多、应用最广泛的基因编辑工具。目前，通过全球基因编辑领域科学家的努力，在野生型CRISPR/Cas9基础上产生了许多突变体，这些突变体能成为更高效、更便捷的基因编辑工具和系统。
派真质粒库全部为自主设计改进的增强型质粒，为保护派真的知识产权，CRISPR系列不作为质粒形态出货，只在派真公司内作包装病毒用，同意这一条款是在派真订购克隆服务的前提条件。派真生物可为您提供多种CRISPR质粒定制及后续的AAV包装服务：
SpCas9/SpCas9HF（XA/XB）
SpCas9是第—个被鉴定的CRISPR核酸酶，其PAM为NGG，PAM序列在基因中出现的频率，大约每8bp出现—次，基因长达4.2Kb。 派真生物以小于300 bp的EFS(EF1a短版本）启动子或miniCMV启动子(180 bp)驱动SpCas9, 使序列总长度不超过AAV的长度限制5Kb。
特点 
- 使用经过优化的sgRNA scaffold，能提高切割效率约40%；
- SpCas9HF：SpCas9高保真度版本。K848A，K1003A, R1060A突变的SpCas9，据报道脱靶现象接近零，而切割活性与野生型相比无显著降低。
SpCas9定制sgRNA长度：19-20 nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sp)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| 广谱启动子驱动SpCas9+ sgRNA表达盒 | ||||
| XA01 | EFS（广谱） | SpCas9 | H1启动子 | 自身／XA03B~ XA27 |
| XA19 | miniCMV | SpCas9 | H1启动子 | 自身／XA03B~ XA27 |
| 广谱启动子驱动SaCas9无sgRNA表达盒 | ||||
| XA02 | EFS | SpCas9 | / | XA03B~ XA27 |
| XA20 | miniCMV | SpCas9 | / | XA03B~ XA27 |
| U6-sgRNA表达盒无SaCas9 | ||||
| XA03B | EFS | mCherry | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA04 | EFS | Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA05 | EFS | mCherry-2A-Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA06 | EFS | Renilaluciferase-2A-Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA07 | EFS | ZsGreen | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA08 | / | / | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA09 | CAG | EGFP-KASH | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA13 | EF1 | mCherry | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA14 | EF1 | Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA15 | EF1 | mCherry-2A-Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA16 | EF1 | Renilaluc-2A-Cre | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 X目的基因floxed小鼠 |
| XA17 | EF1 | ZsGreen | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
| XA27 | CAG | EGFP | U6启动子 | XA01/ XA02/ XB01/ XB02/SpCas9 Tg小鼠 |
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SpCas9HF定制sgRNA长度：19-20 nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sp)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| 广谱启动子驱动SpCas9+ sgRNA表达盒 | ||||
| XB01 | EFS | SpCas9HF | H1启动子 | 自身／XA03/XA04/XA05/XA06 |
| XB03 | EFS | eSpCas91.1 | H1启动子 | |
| XB05 | miniCMV | SpCas9HF | H1启动子 | |
| XB07 | miniCMV | eSpCas91.1 | H1启动子 | |
| 广谱启动子驱动SaCas9无sgRNA表达盒 | ||||
| XB02 | EFS | SpCas9HF | / | XA03/XA04/XA05/XA06 |
| XB04 | EFS | eSpCas91.1 | / | |
| XB06 | miniCMV | SpCas9HF | / | |
| XB08 | miniCMV | eSpCas91.1 | / | |
| XB09 | EFS | Xcas9 | / | |
| XB10 | miniCMV | Xcas9 | / | |
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适用范围：
-
- XA01/XB01自身有SpCas9及sgRNA，能在任何基因型小鼠上单独工作。也可以搭配XA03B~XA27提供其它sgRNA及不同启动子驱动的Cre或跟踪蛋白;
- XA02/XB02/XA20/XB06单独提供EFS或miniCMV驱动的SpCas9表达盒；
- XA03B~XA27还能容纳800~2200nt的供体序列作为基因组修复的模板，AAV基因组是天然的单链DNA，作为提供基因组修复模板相比双链DNA的质粒能高出约50倍同源重组效率。
SaCas9/ SaCas9HF（AC/AD系列）
SaCas9是活性与SpCas9相似的短版本Cas9，基因长度为3.2kb，因为有更严谨的PAM (NNGRRT)，PAM序列在基因中出现的频率，大约每32bp中出现一次，靶序列的长度为21nt-23nt，理论上脱靶率比SpCas9更低。
特点
- 使用了经优化的sgRNA scaffold, 显著提高切割效率；
- SaCas9/SaCas9HF及sgRNA，能在任何基因型小鼠上单独工作。也可以搭配AC043/AC044/AC045提供更多的sgRNA及Cre或跟踪蛋白;
- AC040/ AD040/ AC050~ AC120/ AD050~ AD120需要搭配AC041/ AC043/ AC044/AC045/ AC051~ AC121/；
- AD041 / AD051~ AD121提供 sgRNA;
- AC043/AC044/AC045表达sgRNA及Cre或跟踪蛋白;
- AC043/AC044/AC045还能容纳800~2200nt的供体序列作为基因组修复的模板。AAV基因组是天然的单链DNA，有数据表明，作为提供基因组修复模板相比双链DNA的质粒高出50倍修复效率。
SaCas9定制sgRNA长度：21-23 nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sa)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| CMV启动子驱动SaCas9+ U6-sgRNA表达盒 | ||||
| AC041 | CMV | SaCas9 | U6启动子 | 自身／AC043/AC044/AC045或其它 AC043/AC044/AC045或其它 |
| AC043 | CMV | mCherry | U6启动子 | AC041/AC040/AD041/AD040/ClXX/C2XX |
| AC044 | CMV | Cre | U6启动子 | AC041/AC040/AD041/AD040/目的基因floxed小鼠 |
| AC045 | CMV | mCherry-2A-Cre | U6启动子 | AC041/AC040/AD041/AD040/目的基因floxed小鼠 |
| CMV启动子驱动SaCas9无sgRNA表达盒 | ||||
| AC040 | CMV | SaCas9 | / | AC043/AC044/AC045或其它 |
| 特异性启动子驱动SaCas9 + U6-sgRNA表达盒 | ||||
| AC051 | TBG | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC011 | EFS | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC061 | Elastase I | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC071 | rlnsulin 2 | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC081 | mlnsulin2 | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC091 | hDesmin | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC101 | hSynapsin | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD121 | hMECP2 | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AC061 | Elastase I | SaCas9 | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| 特异性启动子驱动SaCas9无sgRNA表达盒 | ||||
| AC050 | TBG | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC010 | EFS | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC060 | Elastase I | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC070 | rlnsulin 2 | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC080 | mlnsulin2 | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC090 | hDesmin | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC100 | hSyn | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC120 | hMECP2 | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
| AC190 | CBh | SaCas9 | / | 取决于实验设计 |
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SaCas9HF定制sgRNA长度：21-23 nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sa)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| CMV启动子驱动SaCas9HF+ U6-sgRNA表达盒 | ||||
| AD041 | CMV | SaCas9HF | U6启动子 | 自身／AC043/AC044/AC045或其它 |
| CMV启动子驱动SaCas9HF无sgRNA表达盒 | ||||
| AD040 | CMV | SaCas9HF | / | AC043/AC044/AC045或其它 |
| 特异性启动子驱动SaCas9HF+ U6-sgRNA表达盒 | ||||
| AD051 | TBG | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD011 | EFS | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD061 | Elastase I | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD071 | rlnsulin 2 | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD081 | mlnsulin2 | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD091 | hDesmin | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD101 | hSyn | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| AD121 | hMECP2 | SaCas9HF | U6启动子 | 取决于实验设计 |
| 特异性启动子驱动SaCas9HF无sgRNA表达盒 | ||||
| AD050 | TBG | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD010 | EFS | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD060 | Elastase I | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD070 | rlnsulin 2 | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD080 | mlnsulin2 | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD090 | hDesmin | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD100 | hSyn | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
| AD120 | hMECP2 | SaCas9HF | / | 取决于实验设计 |
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AAV-CRISPR基因激活（XE系列）
在14-16 nt的短RNA指导下，野生型SpCas9能结合到靶序列DNA上但不能切割与释放。此时，经过改造加入形成MS2 RNA接头的sgRNA骨架能结合MS2-P65-HSF1 转录激活成分，从而激活下游位置的基因转录。激活基因的转录水平能达1000倍以上。
定制sgRNA长度：14-l5nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sp)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| XE01E | CMV | MS2-P65-HSF1 | U6启动子，带MS2 RNA接头 | XA01/XA02/XB01/XB02/SpCas9小鼠 |
| XE02E | CMV | MS2-P65-HSF1-2A-Cre | U6启动子，带MS2 RNA接头 | XA01/XA02/XB01/XB02/SpCas9X floxed目的基因小鼠 |
特点
- XE01E/XE02E可与XA01/XA02/XB01/XB02或SpCas9小鼠搭配使用;
- XE02E还表达Cre，也适合与SpCas9小鼠、目的基因Floxed的小鼠搭配使用。
其它CRISPR/Cas9质粒（XE系列）
除了SpCas9/SpCas9HF(XA、XB系列）、SaCas9/ SaCas9HF (XC、XD系列）、AAV-CRISPR基因激活(XE系列），派真生物还可以为您提供NmCas9、AsCpfl,、LbCpfl质粒。
定制sgRNA长度：21-23nt
| 载体编号 | 启动子 | 基因 | (Sp)sgRNA | 搭配工作的载体或小鼠 |
| XE01F | EFS | NmCas9 | U6启动子 | 自身 |
| XE02F | miniCMV | NmCas9 | U6启动子 | 自身 |
| XE01G | EFS | AsCpf1 | U6启动子 | 自身 |
| XE02G | miniCMV | NAsCpf1 | U6启动子 | 自身 |
| XE01H | EFS | LbCpf1 | U6启动子 | 自身 |
| XE02H | XE02H | LbCpf1 | U6启动子 | 自身 |
特点
- NmCas9 是跟SpCas9有相似活性的短版本Cas9，基因长度为3.3kb，由于识别更长的PAM（NNNNGATT），PAM序列在基因中出现的频率，大约每128 bp中出现一次，靶序列长度为（21-23 nt)，理论脱靶率比SpCas9低得多；
- AsCpf1、LbCpf1拥有与 CRISPR-Cas9不一样的特性：更短小的sgRNA骨架；识别含T量高的5’PAM；靶标DNA被切于远离PAM的位置，且产生5个碱基突出的粘末端。