知识分享

使用293T细胞来包装慢病毒是因为它们具有许多独特的优势，能够有效促进慢病毒的生产。以下是原因的详细解释： 1. 高转染效率 293T细胞是从人胚肾细胞（HEK293细胞）衍生而来的，其转染效率极高，能够高效地将质粒DNA导入细胞内并进行表达。这种高转染效率使得293T细胞成为包装慢病毒的理想宿主细胞。 2. 病毒滴度高 293T细胞能够支持慢病毒的高效组装和释放，从而获得高滴度的病毒颗粒。高滴度的慢病毒载体对于后续的实验和应用至关重要，因为它可以提高感染效率并减少所需的病毒量。 3. 易于培养和操作...

腺相关病毒（AAV，Adeno-Associated Virus）有多个血清型（Serotype）和变体（Variants），其基于衣壳蛋白的差异决定了它们的生物学特性、组织靶向性以及免疫反应性。以下是AAV的主要分类及其特点： 1. 常见天然血清型 目前已发现的天然AAV血清型超过12种，其中以下几种最常使用： 血清型 主要特点 靶向组织 AAV1 高效转导肌肉细胞 骨骼肌、心肌 AAV2 最广泛研究，转导效率高 神经系统、肝脏 AAV3 较少使用，需辅助因子高 不同组织依赖调控元件 AAV4 对细胞表面糖分子敏感 脑部、视网膜...

不同代的慢病毒包装（第一代、第二代和第三代）因慢病毒载体系统的设计和组成而异。慢病毒是逆转录病毒的一种亚型，可以感染分裂和非分裂细胞，广泛用于基因治疗研究和开发，作为 DNA 递送载体。 从第一代到第三代的进化是由提高安全性、降低产生具有复制能力的慢病毒的风险和提高基因递送效率的需求驱动的。研究人员根据其特定的应用要求和安全考虑来选择慢病毒包装系统。 在设计慢病毒转染方案时，选择正确的慢病毒包装代非常重要。 第一代慢病毒包装： 1、基本慢病毒载体系统由三个质粒组成： 转移载体（包含目标基因） 包装质粒（提供必需的病毒蛋白）...

包装质粒会显著影响慢病毒生产中的滴度水平和转染效率。由包装质粒编码的各种元件的适当平衡和功能对于慢病毒颗粒的成功组装和包装是必要的。 1、质粒比例：调整三种质粒（转移载体、包装质粒和包膜质粒）的比例，以找到高滴度生产的最佳组合。每个质粒的相对量会影响慢病毒包装的效率。 2、启动子强度：使用强且调节良好的启动子来表达必需病毒蛋白（Gag、Pol、Rev、Tat），以确保稳定和高效的慢病毒生产。 3、细胞系：选择具有有利于慢病毒生产的特性的合适包装细胞系。在包装慢病毒时使用 HEK-293T 细胞系。有许多细胞系选择。 4、质粒...

针对两种主流病毒载体在递送特定遗传有效载荷以感染宿主细胞方面的差异。病毒结构、应用和功能存在差异。 下面是关于 AAV 与慢病毒的区别： AAV 与慢病毒：病毒载体的结构差异是什么？ 1、衣壳结构式： 腺相关病毒： AAV 是一种无包膜病毒，这意味着它的衣壳周围没有脂质膜。 二十面体衣壳：AAV 具有对称的二十面体衣壳结构，由蛋白质亚基组成，特别是以精确的几何图案排列的三种病毒蛋白（VP1、VP2、VP3）。 刺突表面衣壳蛋白：衣壳在决定组织嗜性和免疫反应方面起着关键作用。不同血清型的 AAV...

腺相关病毒（AAV）包装通常采用 HEK293 系列细胞，尤其是 HEK293T细胞。这些细胞系适合AAV包装，主要原因如下： 1、高效转染效率：HEK293细胞对质粒转染敏感，能高效地表达包装所需的基因。 2、具有E1基因：HEK293细胞含有腺病毒E1基因，可以补充AAV复制所需的辅助功能。 3、适合大规模培养：HEK293细胞生长迅速，容易扩增并适合悬浮培养，方便工业化生产。   包装过程中涉及的关键质粒 AAV包装一般需要以下三种质粒： 1、载体质粒：包含目的基因以及两侧的反向末端重复序列（ITR）。...

尽管已经取得了实质性进展，但在rAAV的开发中仍然面临几个挑战，这些挑战从根本上影响着基于rAAV的眼科基因治疗的安全性和有效性（图1）。 图1....

腺相关病毒（AAV）目前已发现的血清型有多种，包括但不限于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、PHP.eB、PHP.S、rh10、DJ、2-retro等。每种血清型都有其特定的组织嗜性，这使得它们在不同的基因治疗应用中有不同的优势。以下是一些常见的AAV血清型及其特点： 常见AAV血清类型 1、AAV1 特点：高效感染肌肉细胞、心脏和中枢神经系统。 应用：肌肉相关疾病基因治疗。 2、AAV2 特点：最早被研究和应用的血清型，对多种细胞有中等感染效率。...

腺病毒（Adenovirus）和腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）是两种不同的病毒，尽管名字中都有“腺”字，但它们在结构、功能和应用上有显著的区别。以下是二者的主要差异： 1. 分类和结构 腺病毒 属于腺病毒科（Adenoviridae）。 是一种中等大小的非包膜双链DNA病毒，基因组大小约为26-45 kb。 具有二十面体的衣壳结构，能够引发宿主免疫反应。 感染性较强，可感染多种哺乳动物，包括人类。 腺相关病毒...

慢病毒（Lentivirus）的包装大小指的是其载体可以携带的外源基因的最大长度（基因载量）。下面是慢病毒包装大小相关的关键信息： 慢病毒的基因载量 最大包装容量： 慢病毒的最大基因载量一般为 8-10 kb（包括外源基因和必要的调控元件，如启动子、终止子、标记基因等）。 实际上，外源基因通常限制在 4-6 kb，以保证病毒的高效包装和感染能力。 超过载量的影响： 如果插入的基因片段超过慢病毒的包装容量，可能会导致： 包装效率降低：病毒颗粒的生成受限。 病毒滴度降低：产生的病毒量显著减少。...