知识分享

基因编辑技术领域取得重要突破。近日，据Nature期刊披露，由麻省总医院布莱根妇女医院与贝斯以色列女执事医疗中心的Omar Abudayyeh与Jonathan Gootenberg科研团队研发的STITCHR基因编辑系统，通过创新性的RNA技术实现了从单碱基到12.7kb大片段基因的“无痕”整合，推动基因治疗研究向前迈出了一大步。   相较于传统CRISPR技术，该基因编辑系统展现出三大突破性特征： 更大片段插入能力：突破CRISPR仅能进行较小基因片段编辑的限制，可完整替换更大片段致病基因；...

一、AAV载体的最大包装容量 常规AAV的理论包装容量上限为 4.7 kb，包括所有必需元件（转基因、启动子、polyA、ITR等）。 AAV的ITR（Inverted Terminal Repeats）本身约占每侧145 bp，总共约290 bp。它们是病毒复制和包装必需的，因此必须包含在载体中。 实际上，用于插入外源基因的有效空间通常在4.5 kb左右，因为其他元素也要占空间（如启动子、polyA信号等）。 二、超载怎么办？ 如果目标基因 + 元件总长超过AAV容量，有几种解决思路：...

一、按血清型分类（决定组织嗜性） AAV 的血清型不同，其对不同组织和器官的亲和性也不同，常见的包括： 血清型 特点与用途 AAV1 高效感染骨骼肌、神经组织 AAV2 最早被研究，广泛使用，对多种细胞有较强亲和性，适合体外感染 AAV5 感染肺部、神经系统和肝脏较好 AAV6 与AAV1类似，也适合感染肌肉 AAV8 对肝脏感染效率极高，常用于肝脏靶向表达 AAV9 可穿越血脑屏障，适合中枢神经系统、心脏 AAVrh10 来源于灵长类，神经系统感染效率高   工程化 AAV 变体 AAV-DJ 和...

AAV质粒（腺相关病毒质粒）是用于包装和生产AAV病毒颗粒的重要组成部分，广泛用于基因治疗和基因功能研究。一个完整的AAV病毒包装系统通常包含三类质粒，称为“三质粒系统”。每种质粒的组成和功能如下： 一、载体质粒（Transfer plasmid / Vector plasmid） ITRs（Inverted Terminal Repeats，反向末端重复序列）： 位于5'和3'两端，是AAV基因组的必需元件，约145 bp，参与病毒基因组的打包和复制。 目标基因（GOI, gene of interest）：...

派真生物在GMP级慢病毒生产方面具有很强的实力，以下是其优势： 一、技术与平台优势 1.优势： 拥有符合GMP标准的慢病毒和AAV病毒载体生产平台。 提供从质粒构建、病毒包装到滴度检测的一站式服务。 具备工业级别的规模化生产能力（比如200L甚至更大规模的反应器）。 高滴度慢病毒载体平台：派真生物拥有独特的高滴度慢病毒载体平台，滴度最高可达1E+10 TU/mL，确保病毒载体的高效转导能力，从而提高实验的成功率和稳定性。...

AAV-GFP是一种携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的腺相关病毒（AAV）载体，主要用于基因转导实验。 AAV（Adeno-associated Virus，腺相关病毒） 一种小型病毒，常用于基因递送载体。它安全性高（通常不致病）、可感染多种细胞类型，并能长期表达目标基因，因此在基因治疗和实验室研究中广泛应用。 GFP（Green Fluorescent Protein，绿色荧光蛋白） 源自水母的荧光蛋白，在蓝光激发下会发出绿色荧光。科学家常将GFP作为“报告基因”，用于标记目标基因的表达位置和效率。 AAV-GFP的组合意义...

AAV（腺相关病毒，adeno-associated virus）包装系统常见有两种：三质粒系统和二质粒系统。二质粒系统，指的是在 AAV 病毒包装过程中使用两种质粒来进行共转染。 一、二质粒系统的基本组成 1. AAV载体质粒（AAV vector plasmid） 包含目标基因（GOI）和两侧的AAV ITR（Inverted Terminal Repeat，反向末端重复序列），是病毒基因组的最小包装单位。 2. Helper质粒（Rep/Cap + Helper functions） 这一质粒融合了以下两个功能： AAV 的...

慢病毒感染细胞后导致细胞生长不理想的原因可能涉及多个环节，需要从病毒制备、感染条件、细胞状态以及感染后的处理等方面进行系统性排查。 一、病毒相关因素 1.病毒滴度过低或活性差 病毒制备过程中滴度不足、储存不当（反复冻融或长期保存导致失活）、载体包装效率低。 解决：重新测定病毒滴度（如通过qPCR检测病毒基因组拷贝数），使用新鲜制备的病毒液，避免反复冻融（分装保存）。 2.病毒载体毒性 携带的过表达基因（如促凋亡基因、致癌基因）或shRNA可能对细胞产生毒性。...

慢病毒的滴度（即病毒颗粒的浓度）通常用以下两种单位表示，具体取决于检测方法： 1. 转导单位（Transducing Units, TU/mL） 定义：每毫升中能够成功感染并整合到宿主细胞基因组中的功能性病毒颗粒数量。 检测方法：通过感染靶细胞（如HEK293T细胞）后，检测报告基因（如荧光蛋白GFP、荧光素酶或抗生素抗性基因）的表达来定量。 特点： 反映病毒的功能性活性（即具有感染能力的病毒比例）。 TU/mL与实验条件（如靶细胞类型、感染时间、血清等因素）密切相关，需在相同实验条件下比较。...

携带GFP（绿色荧光蛋白）的AAV（腺相关病毒）载体在科研和基因治疗中具有多重目的，主要通过GFP的荧光标记功能实现以下目标： 1. 示踪基因表达 可视化转染效率：GFP作为报告基因，帮助研究者直观观察AAV是否成功感染目标细胞或组织。荧光信号强弱可反映载体递送效率。 定位感染范围：通过荧光显微镜或流式细胞术，确定AAV在体内/体外的感染区域（如特定脑区、肝脏或肌肉等）。 2. 优化载体设计 启动子/增强子测试：将GFP与不同调控元件（如组织特异性启动子）连接，筛选高效或特异性表达的组合。...